Среди существующих методов диагностики стельности коров наиболее быстрыми по срокам определения являются гормональные иммунохимические методы, основанные на измерении концентрации стероидного гормона прогестерона в молоке или сыворотке крови коров. Наиболее часто, при наличии специализированной лаборатории и соответствующего специального оборудования, используют твердофазный иммуноферментный метод анализа (ИФА) прогестерона в образцах молока, отобранных на 19-21-й день после осеменения. Несмотря на то, что данный метод известен давно и широко распространен во многих зарубежных странах, в России он стал использоваться сравнительно недавно и только в некоторых регионах.
Уровень прогестерона в коровьем молоке изменяется циклично. В момент овуляции в начале полового цикла содержание прогестерона находится на уровне менее 2 нг/мл, а затем постепенно возрастает до максимума (около 10-20 нг/мл) на 13-15 сутки. Если стельность не наступает, то на 19-21 день после последней охоты уровень прогестерона быстро снижается, что указывает на начало следующего цикла созревания яйцеклетки. Если животное становится стельным, то высокая концентрация гормона сохраняется. Таким образом, на 19-21 день цикла концентрация прогестерона у стельной и нестельной коровы существенно различаются. Вывод о статусе коровы проводят на основании полученных значений содержания прогестерона в молоке. При концентрации прогестерона менее 4 нг/мл корова считается нестельной, 4-7 нг/мл – сомнительной, более 7 нг/мл – стельной.