РП ставят методом наслаивания или подслаивания.
При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2…0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2…0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.
Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1-2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.
РП считают положительной, если через 1-2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо. При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.
Методы постановки реакции преципитации
1. Метод наслаивания
В небольшие (уленгутовские) пробирки наливают около 0,3 мл преципитирующей сыворотки, затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в таком же объеме исследуемый экстракт (антиген) так, чтобы была видна граница между двумя компонентами.
2. Метод подслаивания
В небольшие (уленгутовские) пробирки наливают около 0,3 мл исследуемого экстракта (антигена), затем под него подслаивают 0,3 мл преципитирующей сыворотки.
Положительная РП характеризуется появлением в первые 1-2 минуты на границе двух компонентов серо-белого кольца – преципитата, хорошо видимого на черном фоне в проходящем свете.
Проведение контролем:
1. Преципитирующая сыворотка + физраствор – отрицательная реакция.
2. Нормальная сыворотка + исследуемый антиген – отрицательная реакция.
3. Преципитирующая сыворотка + специфический антиген – положительная реакция.
