Предложена унифицированная основа питательной среды для получения бактериальных токсинов, питательная среда для обнаружения СЭА и СЭВ, предложена технология промышленного получения стафилококковых энтеротоксических сывороток типов А и В, разработана производственная технология изготовления иммуноферментной тест-системы для определения СЭА и СЭВ с чувствительностью 2 нг/мл, разработан методологический подход для подготовки культур энтеробактерий для определения энтеротоксина. В настоящее время для индикации СЭ кроме теста кормления обезьян, кошек, котят используют еще тест кормления поросят. Однако, биологические методы индикации энтеротоксинов уступают место серологическим, которые гораздо проще, чувствительнее и дешевле. Для индикации СЭ используются такие методы как метод простой и двойной гельдиффузии, радиальная иммунодиффузия, встречный иммуноэлектрофорез, электроиммунодиффузия, методы агглютинации, такие как метод ингибирования пассивной гемагглютинации, метод агрегат гемагглютинации, метод непрямой пассивной гемагглютинации, метод латексагглютинации, метод коагглютинации, радиоиммунологические методы, методы иммуноферментного анализа.
Реакция агглютинации
Механизм реакции основан на взаимодействии детерминантных групп антигена с активными центрами иммуноглобулина в электролитной среде.
Реакции протекают в две фазы:
- соединение антигена с антителом,
- вторая фаза - выделение в осадок образовавшегося комплекса АГ+АТ.
Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевый осадок, безжгутиковые и бескапсулярные - мелкозернистый, капсульные - тяжистый.
Существуют два способа постановки реакции агглютинации: пластинчатый и пробирочный. Пластинчатый метод является качественной реакцией и служит для предварительного определения вида микроба. Пробирочный метод используется для определения количественного содержания антител, при этом в пробирках ставится развернутая реакция агглютинации. При положительной реакции на дне пробирки образуется осадок (агглютинат). За титр антител принимают последнее разведение, в котором наблюдается четкая агглютинация. Интенсивность оценивается по 4-х крестной системе. Постановка РА должна сопровождаться контролем сыворотки и антигена. Учет реакции агглютинации на стекле производится через 5 - 10 мин, пробирочной - через 18 - 20 часов
Реакция преципитации заключается во взаимодействии мелкодисперсных антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) и образованием преципитата. Постановку РП осуществляют двумя методами: в жидкой среде - по типу реакции флокуляции , кольцепреципитации или в плотной среде в агаре (геле). РП применяют в двух целях: выявление антигенов по известной иммунной преципитирующей сыворотке или антител с использованием известных антигенов. Существует много вариантов постановок реакции, но чаще всего используют следующие методики: реакция преципитации в геле по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия по Манчини, реакция иммуноэлектрофореза, реакция флокуляции , кольцепреципитации.
Дермонекротическая проба. Кролику, у которого на боку выбривают шерсть, вводят внутрикожло 0,2 мл 2-миллиардной взвеси в физиологическом растворе суточной агаровой культуры стафилококка.
Реакцию учитывают через 24—48 ч. При положительном результате на месте введения образуется инфильтрат, а через 48—72 ч — некроз тканей.
