Сульфит редуцирующие клостридии - спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.
Метод определения основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.
Пробу воды 20 мл прогревают на водяной бане в пробирках при температуре 75 +/- 5 °C в течение 15 мин. для исключения вегетативных форм.
Определение методом фильтрования в пробирках
Перед посевом пробирки с железосульфитным агаром, его расплавляют на водяной бане. В течение посева поддерживают среду нагретой до 70 - 80 °C в водяной бане.
После фильтрования установленного объема воды мембранный фильтр фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутый в виде трубочки помещают в пробирку с горячим агаром. Сторона фильтра с осевшими бактериями обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки.
Сразу же после посева пробирку с агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость с холодной водой. Культивируют посевы при 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.
Определение методом фильтрования в чашках Петри
Чашки Петри диаметром 55 - 60 мм заливают тонким слоем железосульфитного агара. После фильтрации фильтр поместить фильтрующей поверхностью вниз на застывшую питательную среду так, чтобы под фильтром не было пузырьков воздуха. Затем заливают расплавленным железосульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий. Культивируют посевы при 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.
Определение прямым посевом
Производят посев 20 мл воды в пробирки с железосульфитным агаром (2 объема по 10 мл в 2 пробирки или 4 объема по 5 мл в 4 пробирки) инкубируют при 44°С 24 ч и посчитывают черные колонии.
Учет результатов
Количественному учету подлежат только те посевы, где получены изолированные колонии. Подсчитывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды. Результат анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфит редуцирующих клостридий в 20 мл воды. При отсутствии роста черных колоний на всех фильтрах дают ответ "не обнаружено в 20 мл воды". При невозможности учета колоний из-за сливного роста результат оценивается как качественный, в протоколе отмечают "обнаружено в 20 мл". При необходимости получения количественного результата анализ повторяют.
