Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды:
1. При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый в пастеровскую или градуированную пипетку, вливают в питательную среду.
2. При посеве на скошенный мясопептонный агар пробирку берут в левую руку между 1 и II пальцами, чтобы основание пробирки находилось на поверхности кисти руки и посев осуществлялся под контролем глаза. Пробку из пробирки вынимают правой рукой V и IV пальцами, не прикасаясь к той части пробки, которая входит внутрь пробирки. Остальные 3 пальца правой руки остаются свободными для взятия бактериальной петли, посредством которой производится посев. Петлю держат, как писчее перо. После вынимания пробки пробирку с питательной средой держат в наклонном положении во избежание попадания в нее посторонних микроорганизмов из воздуха. Петлю с находящимся на ней пересеваемым материалом вводят в пробирку до дна, опускают плашмя на поверхность питательной среды и скользящими движениями наносят штрих снизу-вверх, от одной стенки пробирки к другой.
3. При посеве на поверхность плотной питательной среды в чашки Петри чашку держат в левой руке. Дно ее с одной стороны придерживают 1 и II пальцами, а с другой —IV и V пальцами. Крышку, приоткрытую настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель, фиксируют 1 и III или 1 и II пальцами. Небольшое количество исследуемого материала втирают бактериальной петлей в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериальную петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхности, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки (при условии, что среда прозрачна) на несколько равных частей. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность. Для равномерного распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды можно пользоваться вместо петли тампоном или шпателем. При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного, или газонного. Посев газоном производят, когда нужно получить большие количества микробной культуры одного вида.
4. Из материала, подлежащего посеву в толщу плотной питательной среды, готовят взвесь в стерильной водопроводной воде или в изотоническом растворе. Набирают 0,1—1 мл взвеси в пипетку (в зависимости от степени предполагаемого микробного загрязнения) и выливают в пустую стерильную чашку Петри. Вслед за этим чашку заливают 15 - 20 мл мясопептонного агара, расплавленного и остуженного до температуры 40 - 45 °С (при такой температуре пробирка со средой, приложенная к щеке, не должна вызывать ощущения ожога). Для равномерного распределения исследуемого материала в питательной среде закрытую чашку с содержимым слегка вращают по поверхности стола.
5. Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку, как обычно, и в центре столбика до дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Изучают:
Сахаролитическая активность т.е. способность расщеплять сахара и многоатомные спирты с образованием кислоты и газа, изучают на средах Гисса, которые содержат тот или иной углевод и индикатор. Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор меняет окраску среды. Поэтому эти среды названы «пестрый ряд». Микробы, не ферментирующее данный углевод, растут на среде не измененяя ее. Наличие газа устанавливают по скоплению его в поплавке на жидких средах. На среде: Эндо, Плоскирева микроорганизмы, сбраживая до кислоты находящийся в этих средах молочный сахар (лактозу), образуют окрашенные колонии – кислота изменяет цвет имеющегося в среде индикатора. Колонии микробов не ферментирующих лактозу, бесцветны. При росте микроорганизмов, образующих амилазу, на средах с растворимым крахмалом происходит его расщепление; при добавлении нескольких капель раствора Люголя цвет среды не меняется. А если крахмал нерасщепленный он дает этим раствором синее окрашивание.
Протеолитическая активностьт.е. способность расщеплять белки, полипептиды изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном. При росте на желатиновой среде микробов, ферментирующих желатин, среда разжижается. Характер разжижения различен. Например, бациллы сибирской язвы (B. anthracis) дают характерное разжижение желатина «елочкой». При расщеплении пептидогликанов выделяется индол, сероводород, аммиак. Их образование устанавливают с помощью индикаторных бумажек, которые заранее пропитывают определенными растворами и помещают между пробкой и стеклом пробирки. Аммиак вызывает посинение лакмусовой бумажки. Сероводород – почернение бумажки, пропитанной раствором ацетата свинца. Индол – покраснение бумажки, пропитанной раствором щавелевой кислоты. Кроме этого способность расщеплять различные питательные субстраты определяют с помощью бумажных дисков, пропитанных определенными реактивами. Эти диски опускают в пробирки с исследуемой культурой, инкубируют в термостате и по изменению цвета дисков судят о разложении углеводов, аминокислот, белков и т.д.
Гемолитические свойстват.е. способность разрушать эритроциты – изучают на средах с кровью. Жидкие среды становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колонии появляется прозрачная зона (например, некоторые разновидности стрептококков - β-гемолитический стрептококк), а α-гемолитические стрептококки образуют небольшую зеленоватую зону, что свидетельствует о переходе гемоглобина в метгемоглобин.
