Анаэробы – это микроорганизмы, для жизнедеятельности которых не нужен О2 воздуха.
Методы посева, культивирования и выделения чистых культур анаэробов:
I. ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.
- ПОСЕВ МАТЕРИАЛА В ГЛУБИНУ ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД. Посев производят путем «укола» бак иглой или петлей (смоченной исследуемым материалом) в пробирку со столбиком плотной среды (с высоким столбиком сахарозного агара). Либо ведут посев в расплавленную плотную или полужидкую питательную среду с последующим перемешиванием. В данном случае рост должен происходить в нижних слоях агара (там меньше О2).
- МЕТОД КОХА (МЕТОД ГЛУБИННОГО ПОСЕВА). Поверхность глубинного посева в чашке Петри заливают стерильной смесью парафина и вазелина (1:1). Закрывают резиновой пробкой. Чтобы извлечь выросшие колонии (анаэробов), пробирки слегка нагревают. Агар, прилегающий к стенкам, расплавляется, и столбик легко выскальзывает в подготовленную чашку Петри. Далее столбик с агаром разрезают стерильным скальпелем, колонии извлекают стерильной петлей и переносят в жидкую среду.
- ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕДУЦИРУЮЩИХ, ОКИСЛЯЮЩИХ ВЕЩЕСТВ И МАСЛА. Эти вещества добавляют в питательную среду. Редуцирующими (связывающими) веществами являются: кусочки животных тканей (печени, кожи, сердца, костного мозга), кусочки растительных тканей, кусочки ваты, тиогликолят натрия, солянокислый цистеин. Окисляющими веществами (антиоксидантами) является глюкоза. Примеры сред: Китта-Тароци (там МППБ – мясо-пептонный печеночный бульон + кусочки вареной печени + слой маславазелиновыйм или парафиновым, все стерильно).
- МЕТОД ВИНЬЯЛЯ-ВИОНА. При этом методе используют специальные стеклянные трубочки (пипетка Пастера). В трубочки насасывают расплавленный агар (перемешанный с иссл материалом). Трубочку запаивают с 2-х концов. Культивируют. В стерильных условиях трубочку вскрывают, извлекают колонии бак петлей.
- МЕТОД С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СПЕЦИАЛЬНЫХ ПРИБОРОВ И АППАРАТОВ (АНАЭРОСТАТ И ЭКСИКАТОР).
- МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ В АТМОСФЕРЕ ИНЕРТНОГО ГАЗА, ДИОКСИДА УГЛЕРОДА, АЗОТА.
II. ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Эти методы основаны на применении различных химических веществ, в результате взаимодействия веществ происходит химическая реакция с активным поглощением О2 воздуха.
- ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОСТОГО ХИМИЧЕСКОГО ЭКСИКАТОРА. В эксикатор кладут 1 кусочек ваты, смоченный 96% спиртом. Ватку поджигают. Эксикатор закрывают. В процессе горения спирта, О2 сгорит.
- МЕТОД АРИСТОВСКОГО. В 2 крышки от чашки Петри насыпают порошок углекислой соды, на который насыпают гидросульфид Na. К этим веществам добавляют немного воды. Одну крышку ставят на дно анаэростата, эксикатора, далее помещают посевы, над которыми ставят 2-ю крышку с химическим веществом.
III. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.
- МЕТОД ФОРТНЕРА. При совместном культивировании анаэробов и аэробов в чашке Петри, создаются анаэробные условия за счет того, что аэробы растут первыми и поглощают О2, имеющийся в чашке. Чашка должна быть запаена парафином.
IV. КОМБИНИРОВАННЫЙ МЕТОД.
- ПОСЕВ ПО ЦЕЙСЛЕРУ. Берут 3 чашки Петри с глюкозо-кровяным агаром, в 1-ю чашку наносят каплю иссл материала, затем шпателем (бак петлей) материал размазываю по поверхности. Далее не обрабатывая петлю с остатками материала делают посев на 2-ю чашку. Посев помещают в эксикатор и культивируют.
