1)Реакции преципитации
В основе реакций преципитации лежит образование и выпадение в осадок комплексов антиген-антитело. В реакции участвуют растворимые антигены – преципитиногены (продукты микроорганизмов, тканей, химические вещества и лекарства). Антитела (преципитины), соединяясь с растворимыми антигенами, вызывают их агрегацию, что проявляется в помутнении прозрачных жидкостей или выпадении осадка (преципитата). Диагностические преципитирующие сыворотки выпускают с высоким титром антител. Их получают путем иммунизации лабораторных животных соответствующим антигеном. Титром преципитирующей сыворотки является минимальное количество антигена, которое данная сыворотка может преципитировать.
Иммунодиффузия в геле лежит в основе реакции преципитации по Манчини, которая используется для определения классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (см. гл. «Оценка иммунного статуса, характеристика В-лимфоцитов»).
Реакции преципитации используются для: определения антигенов бактерий, тканей человека и животных; диагностики некоторых инфекционных заболеваний; определения видовой принадлежности белка в судебной медицине; выявления примесей в мясных, рыбных, мучных изделиях в санитарной практике.
Реакцию преципитации можно проводить в жидкой и плотной среде – (в агаре или геле).
Реакция преципитации в жидкой среде (кольцепреципитация).
Реакцию ставят в узких пробирках, куда вносят преципитирующую антисыворотку, а сверху осторожно наслаивают прозрачный раствор антигена. При положительной реакции через несколько минут на границе соприкосновения двух жидкостей появится кольцо преципитации. При малых количествах реагентов реакцию можно проводить в капиллярах (микропреципитация).
Реакция преципитации в агаре.
Сущность реакции в том, что антигены и антитела, помещенные в разные лунки в агаре, диффундируют навстречу друг другу и при взаимодействии образуют комплекс, который осаждается в виде линии преципитации.
Метод определения токсигенности микробов в реакции преципитации.
Принцип иммунодиффузии в геле положен в основу метода, который применяется для изучения токсигенности (способности вырабатывать токсин) бактерий. Например, для обнаружения дифтерийного токсина на чашку Петри с агаром посередине накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической сывороткой. Рядом засевают исследуемые культуры бактерий. Если они выделяют токсин, то при взаимодействии с антитоксинами между колониями и полоской бумаги образуются линии преципитации.
2)
|
ИЕРСИНИИ ЧУМЫ |
|
Enterobacteriaceae род Yersinia Yersinia pestis (подвиды pestis, altaica, caucasica) |
|
Грамотрицательные, овоидные коккобактерии (характерен полиморфизм), неподвижные, неспорообразующие, с биполярной окраской, образующие капсулу в организме человека и на свежих средах при 370С. Имеют фимбрии для адгезии. |
|
Антигенная структура: 1. О-антиген (ЛПС) – вызывает деструкцию тканей. 2. Капсульный антиген (F1-фракция) – обладает сильной иммуногенностью и препятствует фагоцитозу. 3. V-антиген и W-антиген – обладают антифагоцитарными свойствами. 4. F2-фракция – экзотоксин белковой природы. В отличие от других иерсиний, Y.pestis однородна в антигенном отношении, серологической классификации этого вида нет (1 серотип). |
|
Y.pestis является самой патогенной и агрессивной среди бактерий, поэтому вызывает наиболее тяжелое заболевание. У всех чувствительных к нему животных и у человека возбудитель чумы подавляет фагоцитарную функцию, подавляет в фагоцитах “окислительный взрыв” и беспрепятственно размножается. Характерна высокая инвазивность, способность проникать даже через неповрежденные кожные покровы. Факторы патогенности: 1. Капсула. 2. Антигены вирулентности (угнетение фагоцитоза). 3. Эндотоксин. 4. Ферменты агрессии и инвазии (плазмокоагулаза, фибринолизин) – способствуют паразитированию возбудителя. 5. Пестицин (антагонистические свойства возбудителя). 6. Экзотоксин («мышиный токсин»). 7. Пили (адгезия). |
|
Хемогетероорганотрофы, психрофилы, аэробы, ауксотрофы (нуждаются в аминокислотах). Хорошо растут на простых средах. МПБ – «сталактитовый рост». На МПА развитие колоний проходит 3 стадии: 1) через 10-12 часов рост в виде бесцветных пластинок “битого стекла” – S-форма колоний, авирулентная форма. 2) через 18-24 часа – рост колоний с приподнятыми краями, напоминает кружевной платочек, с желтоватой либо буроватой окраской выступающей центральной части, основной вирулентный R-тип. 3) Через 48ч. Наступает стадия “взрослой колонии” с буровато-очерченным центром и периферической зоной. Специальные среды: среда Туманского-Ленской (МПА + антифаговая сыворотка + гемолизированная кроличья кровь + генцианфиолет для устранения сопутствующей микрофлоры). На кровяном агаре дает рост с отрицательным гемолизом. |
|
Важный признак – отсутствие ферментации сахарозы и лактозы. Остальные углеводы разлагают до кислоты. Не разлагают мочевину. Ферментируют белки до сероводорода. Как все энтеробактерии каталазаположительны и оксидазоотрицательны. |
|
Материал для исследования: отделяемое из язв, пунктаты лимфоузлов, кровь, мокрота, ликвор, фекалии, слизь из зева, трупный материал. 1. Бактериоскопический метод (окраска по Граму). 2. Бактериологический метод (сеют на простые среды, идентификацию осуществляют по морфологическим, биохимическим, культуральным, антигенным свойствам и признакам патогенности). ? Ускоренный бактериологический метод – посев на среды с чумным бактериофагом, оценивают результаты по наличию негативных фаговых колоний. 3. Экспресс-диагностика (определение антигенов чумы в материале от больного) – ИФА, РИФ, РНГА, 4. Генодиагностика (ПЦР). 5. Биологический метод (заражение морских свинок). 6. Серологический метод: исследуют сыворотку больного (ретроспективный анализ). |
|
Чума – природно-очаговое, трансмиссивное, антропозоонозное заболевание, относящееся к особо опасным карантинным инфекциям. Характеризуется лихорадкой, тяжёлой интоксикацией, серозно-геморрагическим воспалением лимфатических узлов, поражением внутренних органов, септицемией, высокой летальностью, быстрым распространением на целые материки. Патогенез: при температуре 280С чумной микроб не образует многих антигенов вирулентности, однако при попадании в организм начинает продуцировать эти факторы и вирулентность возрастает. В месте внедрения возбудитель поглощается макрофагами, где частично погибает, а выжившие бактерии попадают в регионарные лимфоузлы. Развивается серозно-геморрагическое воспаление лимфатических узлов и образуется первичный резко болезненный бубон (спаянные между собой лимфоузлы). Гнилостная микрофлора может вызывать нагноение бубонов. Сначала развивается бактериемия, затем септицемия. В патогенезе выделяют три основных стадии - лимфогенного заноса в лимфоузлы, бактериемии, генерализованной септицемии. Клинические формы: 1. Кожная форма (появление некротической язвы у входных ворот). 2. Бубонная форма (геморрагическое воспаление регионарного лимфоузла). 3. Первично-септическая форма (бурное начало, озноб, лихорадка, сильнейшая головная боль, бред, кома, возбудитель в крови (септицемия) вызывает токсический шок с повреждением кровеносных сосудов, характерные геморрагии на коже чернеют (“черная смерть”), часто заканчивается смертью). 4. Вторично-септическая форма (осложнение других форм, очень тяжёлое течение, прижизненная диагностика затруднена). Возбудитель с кровью (септикопиемия), разносится по организму, образуя вторичные очаги во внутренних органах, геморрагические кровоизлияния в них. 5. Первично-легочная форма (наиболее тяжёлая и эпидемиологически очень опасная, характеризуется пневмонией с геморрагическими изменениями в лёгких, выделением кровянистой мокроты с большим количеством возбудителя, изменения в ССС, отёк легких, смерть). 6. Вторично-легочная форма (осложнение других форм). 7. Кишечная форма – развивается при фекально-оральном МП, кровянистый стул на фоне основных клинических проявлений. 8. Чума у вакцинированных (протекает более легко, если проводится адекватная антибиотикотерапия). |
|
Выделяют первичные очаги чумы – природные («дикая чума») и синантропные очаги чумы – вторичные («городская», «портовая», «крысиная», «корабельная» чума). Природные очаги сложились в древние времена. Циркуляция возбудителя происходит между дикими животными (особенно грызунов – суслики, крысы, морские свинки) и кровососущими членистоногими (блохи, клещи). Человек инфицируется через укусы переносчиков возбудителя или при контакте с кровью инфицированных животных. Синантропные очаги являются вторичными. В них источниками инфекции являются домашние мыши и крысы. Наибольшее значение из переносчиков имеют крысиные блохи. Входные ворота – кожа и слизистые оболочки.
Пути передачи: 1. Трансмиссивный (через укусы инфицированных блох). 2. Контактный (при разделке шкурок). 3. Алиментарный. 4. Аэрогенный (контакт с больными легочной формы чумы). |
|
Иммунитет стойкий. Специфическая профилактика для групп риска по эпидпоказаниям и в очагах чумы: 1. Живая аттенуированная вакцина из штамма EV (Жерара-Робика). Иммунитет сохраняется до года. Применяется аллергодиагностика для оценки иммунитета и ретроспективной диагностики чумы – внутрикожная проба с пестином. 2. Реже – химическая вакцина. 3. Иммуноглобулин противочумный или противочумная сыворотка (серотерапия вместе с антибиотикотерапией). Неспецифическая профилактика по выявлению очагов чумы – дезинфекция, дератизация, дезинсекция в очагах, выявление и лечение больных, объявление карантина, обсервация контактных, работа в специальных противочумных костюмах, выполнение международных конвенций по профилактике чумы и др. |
3)
|
ОРТОМИКСОВИРУСЫ |
|
Семейство Orthomyxoviridae Роды Influenzavirus A, B и Influenzavirus C, различающиеся между собой по нуклеопротеидным антигенам: n вирус типа А n вирус типа В n вирус типа С ?Вирус типа С выделен в отдельный род, так как 7 фрагментов РНК, нет нейраминидазы, нет антигенной изменчивости (дрейфа и шифта), для адсорбции на клетке используется другой тип рецепторов Жизненный цикл начинается в цитоплазме, геном синтезируется в ядре. |
|
Вирион имеет сферическую форму, диаметр 80-120 нм, вирус сложный (суперкапсид), тип симметрии - спиральный. Генома состоит из 8 фрагментов РНК и 4 капсидных белков: 1. Нуклеопротеид (NP), типоспецифичен, выполняет структурную и регуляторную роль 2. Транскриптаза (РНК-полимераза) 3. Эндонуклеаза 4. Репликаза Суперкапсид имеет два гликопротеина, которые входят в состав поверхностных шипов: 1. Гемагглютинин 2. Нейраминидаза Основные функции гемагглютинина вируса гриппа: 1) распознавание чувствительных клеток (клетки верхнего ДТ, покрытые сиаловой кислотой); 2) слияние с мембраной клетки, 3) пандемичность вируса (смена гемагглютинина - причина пандемий, его изменчивость – причина эпидемий гриппа); 4) формирование иммунитета. У вирусов гриппа А человека, млекопитающих и птиц обнаружено 13 антигенных типов гемагглютинина (H1-Н13). Функции нейраминидазы: 1) диссеминация вирионов; 2) пандемические и эпидемические свойства вируса. У вируса гриппа А обнаружено 10 различных вариантов нейраминидазы (N1-N10) ?Таким образом, характерной особенностью вирусов гриппа типа А является высокая изменчивость антигенов Н и N. Из всех типов в состав вируса гриппа человека типа А входят 3 Н и 2 N. В зависимости от их сочетания выделяют три подтипа Н1N1, Н2N2, Н3N2. Изменчивость обусловлена двумя генетическими процессами. Дрейф – небольшие изменения гликопротеинов, не выводящие штамм вируса за пределы данного подтипа (благодаря точечным мутациям генов). Шифт (скачок) – определяет полную замену антигенов в результате чего появляется новый подтип вируса (замена генов в связи с рекомбинациями между вирусами человека, животных и птиц). Типы С – стабильный. Тип В – дрейф выражен слабее, шифта нет. |
|
Вирус гриппа чувствителен к нагреванию (при 65°С погибает в течение 5-10 мин.), высушиванию, действию солнечных лучей, при комнатной температуре погибает за несколько часов, легко обезвреживается дезинфицирующими веществами |
|
Вирус типа А вызывает грипп у человека, млекопитающих и птиц, а вирусы типа В и типа С - только у человека. Вирус типа А вызывает пандемии и эпидемии, вирус типа В – эпидемии и локальные вспышки, вирус типа С – только спорадические случаи Источник инфекции - только человек, больной или носитель. Путь заражения - воздушно-капельный. Инкубационный период очень короток – от нескольких часов до 2 дней. ?Основным регулятором эпидемий гриппа является иммунитет |
|
Материалом для исследования служит: Отделяемое носоглотки (получают либо путем смыва, либо с помощью ватно-марлевых тампонов), мазки-отпечатки слизистой носовых ходов, кровь и секционный материал. 1. Экспресс-диагностика: ?Прямой РИФ или ИФА (обнаружить вирусный антиген в мазках-отпечатках или в смывах из носоглотки больных). 2. Вирусологический: ?Заражение 10-11-дневных куриных эмбрионов (лучше в амниотическую полость). Вирус обнаруживают (индикация) в содержимом амниотической полости с помощью РГА, используют эритроциты кур, морских свинок и 0-группы крови. Идентифицируют вирус с помощью РТГА, применяя специфические сыворотки. 3. Серологический метод: ?Специфические антитела и возрастание их титра в 4 раза минимум (в парных сыворотках) выявляют с помощью РТГА, РСК, ИФА. Вирус гриппа типа B можно культивировать в культурах тканей. |
|
1) живая из аттенуированного вируса 2) убитая цельновирионная 3) субвирионная вакцина (из расщепленных вирионов) 4) субъединичная вакцина, содержащая только гемагглютинин и нейраминидазу. Детей от 6 мес. до 12 лет, по рекомендации ВОЗ, следует прививать только субъединичной вакциной как наименее реактогенной и токсичной («Гриппол»). |
