Таксономия,пневмококк,методы лаб д. гриппа

ПНЕВМОККОКИ

Firmicutes, Streptococcaceae, Streptococcus

Относится к группе пиогенных кокков, так как вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации. Представляет собой условно-патогенную микрофлору верхних дыхательных путей (носоглотки).

S.pneumoniae представляет собой ланцетовидной формы диплококки, заключённые в полисахаридную капсулу (в мазках из патматериала). Имеет тропизм к легочной ткани, что обусловлено наличием специальных адгезинов.

Капсула имеет диагностическое значение. По полисахаридному капсульному антигену различают 84 серотипа (типоспецифический антиген). Данный антиген является протективным. В схему Ленсфильд S.pneumoniae не входит.

?Мембраноповреждающий токсин – пневмолизин (аналог О-стрептолизина) (осмотический лизис эритроцитов). Разрушает реснички мерцательного эпителия.

?М-белок и полисахаридная капсула обеспечивают устойчивость к фагоцитозу и адгезию. Капсула является главным фактором патогенности. Бескапсульные пневмококки авирулентны. Капсула обладает токсичностью и активирует комплемент.

?Субстанция С – тейхоевая кислота клеточной стенки, содержащая холин и взаимодействующая с С-реактивным белком, стимулируя воспалительные реакции.

? Различные ферменты – гиалуронидаза, пептидаза секреторного Ig A и другие.

Капнофилы (5-10% СО₂), факультативные анаэробы, мезофилы, требовательны к питательным средам (хорошо растут на кровяном агаре, сердечно-мозговых средах, эритрит агаре). На кровяном агаре – мелкие блестящие колонии с частичным гемолизом.

1.       Каталазотрицательны (тест на семейство);

2.       Гемолитически активны (?-гемолиз).

3.       Основные видовые тесты: ферментация инулина, лизис на средах с 10% желчью, чувствительность к оптохину.

Материал для исследования зависит от формы пневмококковой инфекции (мокрота, кровь, гной, фарингеальные мазки на выявление носительства).

1. Экспресс-методы (обнаружение возбудителя в патматериале):

? Микроскопическое исследование (по Граму и по Бурри-Гинсу);

? Реакция «набухания капсулы» при обработке поливалентной противокапсульной сывороткой.

? Обнаружение антигена в патматериале (РСК, РИФ).

2. Бактериологический метод (культивируют в эксикаторе со свечой).

3. Серологический метод (определяют противокапсульные антитела).

4. Биологическая проба (внутрибрюшинное заражение белых мышей мокротой).

В норме - персистенция в верхних дыхательных путях. При ослаблении иммунитета попадают в нижние дыхательные пути, и возникает эндогенная инфекция. Возможно воздушно-капельное заражение восприимчивых людей – экзогенная инфекция. Инфицирование дыхательных путей чаще происходит при нарушении их целостности при вирусных инфекциях (бактериальные пневмонии как вторичные инфекции на фоне ОРВИ).

Заболевания пневмококковой этиологии – пневмония, менингит, отит, конъюнктивит, сепсис и др.

Источник инфекции – больные и бактерионосители. Входные ворота – слизистые оболочки.

Механизм передачи – контактный, аэрогенный.

Вакцины, приготовленные из высокоочищенных  капсульных полисахаридов наиболее патогенных серотипов. Иммунитет – типоспецифический.

При  исследовании неконтаминированных материалов (кровь, плевральная жидкость) этиологический диагноз может быть установлен на основании факта выявления самого возбудителя и его антигенов. При исследовании контаминированных материалов (мокрота) необходимо принимать во внимание, что выделенный пневмококк может быть комменсалом верхних дыхательных путей и то, что пневмония – это полиэтиологичное заболевание. Точный диагноз может быть установлен при использовании комплекса методов с учётом критериев: выделение П. в диагностической концентрации (10⁵/мл) из мокроты, сероконверсия в парных сыворотках больного, изоляция П. из крови или плевральной жидкости.

ОРТОМИКСОВИРУСЫ

Семейство Orthomyxoviridae

Роды Influenzavirus A, B и Influenzavirus C, различающиеся между собой по нуклеопротеидным антигенам:

n      вирус типа А

n      вирус типа В

n      вирус типа С

?Вирус типа С выделен в отдельный род, так как 7 фрагментов РНК, нет нейраминидазы, нет антигенной изменчивости (дрейфа и шифта), для адсорбции на клетке используется другой тип рецепторов

Жизненный цикл начинается в цитоплазме, геном синтезируется в ядре.

Вирион имеет сферическую форму, диаметр 80-120 нм, вирус сложный (суперкапсид), тип симметрии - спиральный. Генома состоит из 8 фрагментов РНК и 4 капсидных белков:

1.      Нуклеопротеид (NP), типоспецифичен, выполняет структурную и регуляторную роль

2.      Транскриптаза (РНК-полимераза)

3.      Эндонуклеаза

4.      Репликаза

Суперкапсид имеет два гликопротеина, которые входят в состав поверхностных шипов:

1.      Гемагглютинин

2.      Нейраминидаза

Основные функции гемагглютинина вируса гриппа:

1) распознавание чувствительных клеток (клетки верхнего ДТ, покрытые сиаловой кислотой);

2) слияние с мембраной клетки,

3) пандемичность вируса (смена гемагглютинина - причина пандемий, его изменчивость – причина  эпидемий гриппа);

4) формирование иммунитета.

У вирусов гриппа А человека, млекопитающих и птиц обнаружено 13 антигенных типов гемагглютинина (H1-Н13).

Функции нейраминидазы:

1) диссеминация вирионов;

2) пандемические и эпидемические свойства вируса.

У вируса гриппа А обнаружено 10 различных вариантов нейраминидазы (N1-N10)

?Таким образом, характерной особенностью вирусов гриппа типа А является высокая изменчивость антигенов Н и  N. Из всех типов в состав вируса гриппа человека типа А входят 3 Н и 2 N. В зависимости от их сочетания выделяют три подтипа Н1N1,  Н2N2, Н3N2. Изменчивость обусловлена двумя генетическими процессами.

Дрейф – небольшие изменения гликопротеинов, не выводящие штамм вируса за пределы данного подтипа (благодаря точечным мутациям генов). Шифт (скачок) – определяет полную замену антигенов в результате чего появляется новый подтип вируса (замена генов в связи с рекомбинациями между вирусами человека, животных и птиц). Типы С – стабильный. Тип В – дрейф выражен слабее, шифта нет.

Вирус гриппа чувствителен к нагреванию (при 65°С погибает в течение 5-10 мин.), высушиванию, действию солнечных лучей, при комнатной температуре погибает за несколько часов, легко обезвреживается дезинфицирующими веществами

Вирус типа А вызывает грипп у человека, млекопитающих и птиц, а вирусы типа В и типа С - только у человека. Вирус типа А вызывает пандемии и эпидемии, вирус типа В – эпидемии и локальные вспышки, вирус типа С – только спорадические случаи

Источник инфекции - только человек, больной или носитель.

Путь заражения - воздушно-капельный.

Инкубационный период очень короток – от нескольких часов до 2 дней.

?Основным регулятором эпидемий гриппа является иммунитет

Материалом для исследования служит:

Отделяемое носоглотки (получают либо путем смыва, либо с помощью ватно-марлевых тампонов), мазки-отпечатки слизистой носовых ходов, кровь и секционный материал.

1. Экспресс-диагностика:

?Прямой РИФ или ИФА (обнаружить вирусный антиген в мазках-отпечатках или в смывах из носоглотки больных).

2. Вирусологический:

?Заражение 10-11-дневных куриных эмбрионов (лучше в амниотическую полость).

Вирус обнаруживают (индикация) в содержимом амниотической полости с помощью РГА, используют эритроциты кур, морских свинок и 0-группы крови. Идентифицируют вирус с помощью РТГА, применяя специфические сыворотки.

3. Серологический метод:

?Специфические антитела и возрастание их титра в 4 раза минимум (в парных сыворотках) выявляют с помощью РТГА, РСК, ИФА.

Вирус гриппа типа B можно культивировать в культурах тканей.

1) живая из аттенуированного вируса

2) убитая цельновирионная

3) субвирионная вакцина (из расщепленных вирионов)

4) субъединичная вакцина, содержащая только гемагглютинин и нейраминидазу. Детей от 6 мес. до 12 лет, по рекомендации ВОЗ, следует прививать только субъединичной вакциной как наименее реактогенной и токсичной («Гриппол»).