микроскопы,стафилококки,герпес

Тип микроскопии

Вид микроскопии

Используемый микроскоп

Эффект

(принцип метода)

Применение в микробиологии

Электронная

микроскопия

Электронный

Вместо светового пучка используется пучок электронов

·   Изучение вирусов

·   Изучение ультраструктуры микробной клетки

Световая

микроскопия

Обычная световая

Биологический микроскоп

См. курс физики

В микробиологии используется редко

Иммер-

сионная

Биологический микроскоп + иммерсионный объектив

Иммерсионное масло, помещаемое между предметным стеклом и объективом, устраняет потери попадающих в объектив лучей света вследствие своего одинакового со стеклом коэффициента преломления

Наиболее часто используется в бактериологии для микроскопического метода исследования

Темно-польная

Биологический микроскоп + темнопольный конденсор

В объектив попадают лишь преломленные на объекте лучи (светлый объект на темном фоне)

Используется для микроскопии очень тонких объектов – например, спирохет

Фазово-контрастная

Биологический микроскоп + фазово-контрастная приставка

Превращает изменение фазы световой волны, которая меняется при прохождении прозрачных объектов, в воспринимаемое глазом изменение ее амплитуды

Используется для изучения прозрачных, неокрашенных, объектов – например, микоплазм

Люмине-сцентная

(флюоре-сцентная)

Люминесцен-тный

(флюоресцен-тный)

микроскоп

Регистрирует фотолюминесценцию объекта (свечение под действием ультрафиолета)

·   Микроскопия мазков, окрашенных флюоресцирующими красками (аурамин, родамин, корефосфин и др.)

·   Оценка реакции иммунофлюоресценции (РИФ)

СТАФИЛОКОККИ

Firmicutes, Micrococcaceae, Staphylococcus

Группа пиогенных кокков, так как вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации. Представители нормальной микрофлоры (колонизируют слизистые оболочки ротовой полости, носа, кишечника, кожу). Широко распространены в окружающей среде.

Наиболее патогенным для человека является S.aureus. Остальные виды относятся к условно-патогенным: S.epidermidis, S.saprophyticus и др.

Кокки в виде гроздьев винограда, грамположительны, неподвижны, аспорогенны, микрокапсула, возможна L-трансформация. В состав клеточной стенки S.aureus входит белок А.

? Антигенная структура очень сложная. В наличии более 50 типов антигенов, среди которых выделяют родовые, видовые, типоспецифические и ПРА (с изоантигенами кожи, почек, эритроцитов). Антигенными свойствами обладают пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А, капсула, токсины.

? На основе продуцирования коагулазы выделяют КПС (коагулазоположительные стафилококки - среди данной группы заболевания у человека вызывает лишь S.aureus) и КНС (коагулазонегативные) S.epidermidis, S.saprophyticus – вызывают ГСИ, особенно у новорожденных.

?Адгезивные факторы: микрокапсула, тейхоевые кислоты, белок А и др.

?Антифагоцитарным и антикомплементарным действием обладают микрокапсула, белок А (белок А связывает Fc-фрагмент IgG и блокирует его).

?Токсические субстанции (компоненты клеточной стенки) – активируют комплемент по альтернативному пути, свёртывающую систему крови, стимулируют развитие воспалительных реакций за счёт хемоаттракции лейкоцитов, а также стимуляции продукции эндогенных пирогенов (ИЛ-1).

?ЭКЗОТОКСИНЫ:

1. Эксфолиатины А и В (суперантигены? поликлональная активация Т-клеток, вызывающая избыточную продукцию цитокинов) вызывают синдром «ошпаренной кожи» за счёт дерматонекротического действия;

2. TSST-суперантиген (? синдром токсического шока);

3. Мембраноповреждающие токсины:

Лейкоцидины (цитотоксическое действие на гранулоциты) - только для S.aureus

Гемолизины (?, ?, ?, ? типа) вызывают гемолиз не только эритроцитов, но и осмотический лизис тромбоцитов, гранулоцитов, моноцитов, эпителиоцитов, макрофагов – особенно важен ?-гемолизин (или ?-токсин). Характерны только для S.aureus. Обладают антигенными свойствами, из них получают анатоксины, использующиеся для лечения и профилактики стафилококковых инфекций.

4. Энтеротоксины A-Е (также суперантигены) – термостабильные белки, которые ответственны за развитие интоксикаций. Как правило, это молочные продукты, консервы с маслом.

?ФЕРМЕНТЫ:

1. Каталаза (защищает от кислород-зависимых бактерицидных механизмов фагоцитов).

2. ?-лактамаза (разрушает антибиотики и кодируется плазмидами).

3. Липаза, протеаза, фосфатаза, нейраминидаза, гиалуронидаза разрушают соответствующие ткани и способствуют распространению возбудителя в организме (инвазия); S.aureus также обладает ДНК-азой (расщепление ДНК и разжижение гноя).

4. Плазмокоагулаза или коагулаза (повышает свёртываемость крови, что создаёт «фибриновый чехол» вокруг возбудителя и препятствует фагоцитозу). Обладает только S.aureus (КПС).

5. Лецитиназа (разрушает лецитин клеточных мембран лейкоцитов и вызывает лейкопению). Обладает только S.aureus.

6. Фибринолизин или стафилокиназа (растворяет фибриновые сгустки, ограничивающие местный воспалительный процесс, что способствует генерализации процесса).

Факультативные анаэробы, мезофилы, галотолерантны (7-15%), неприхотливы к питательным средам, характерно пигментообразование. Колонии S.aureus 2-4 мм золотистого цвета, колонии S.epidermidis мелкие, серые. S.saprophyticus крупные, белые или лимонно-жёлтые.

ЖСА (МЖСА) - элективные солевые среды – проявляются пигменты, выявляется лецитиназа в том, что вокруг колоний образуются зоны помутнения с радужным блеском.

Кровяной агар - S.aureus вызывает  полный гемолиз (благодаря продукции гемолизинов).

МПБ (также солевой или сахарный бульон как среды обогащения) – диффузное помутнение среды.

1.      Каталазоположительны (тест на семейство) для дифференциации стафилококков и стрептококков;

2.      Биохимически активны, расщепляют углеводы до кислоты. Значение в дифференциации стафилококков и стрептококков имеет тест на сбраживание глюкозы и маннита (стафилококки сбраживают данные углеводы в аэробных и анаэробных условиях, а стрептококки – только в анаэробных).

3.      Разжижают желатин в виде воронки, сворачивают молоко, белок расщепляют до сероводорода, восстанавливают нитраты в нитриты, индола не образуют.

4.      Синтезируют бактериоцины и лизируются типовыми бактериофагами (что используется в эпидемическом маркировании штаммов при установлении источника инфекции; методы называются бактериоцинотипирование и фаготипирование).

5.      Из ферментов, участвующих в патогенезе инфекций S.aureus, наиболее значимыми являются плазмокоагулаза (КОАГУЛАЗНЫЙ ТЕСТ – основной тест на патогенность S.aureus) и частично ДНК-аза (используется в дифференциации видов).

Материал для исследования – гной, кровь, мокрота, моча, отделяемое ран, испражнения, рвотные массы, пищевые продукты. Кровь при сепсисе берут из локтевой вены (при повышении температуры и до начала антибиотикотерапии), затем «у постели больного» в соотношении 1:10 засевают в сахарный бульон. При специальных исследованиях – смывы с инструментов, материалы медицинского назначения, воздух в операционных.

1.      Микроскопический метод (по Граму);

2.      Бактериологический метод.

3.      Серологический метод (определяют уровень антитоксических антител с помощью РП в геле; антимикробные антитела – ИФА).

S.aureus обладает полиорганным тропизмом и вызывает более 100 нозологических форм заболеваний. Формы инфекций: 1) Большинство - Эндогенные (в том числе, аутоинфекции); 2) Экзогенные инфекции; 3) Нозокомиальные (ВБИ), вызванные резистентными штаммами.

Имеют место локальные (местные) процессы, которые часто переходят в генерализованные формы (это зависит от вирулентности возбудителя и резистентности организма).

Выделяют основные инфекционные заболевания:

1. Кожные гнойничковые инфекции (фурункулы, карбункулы).

2. Раневые инфекции

3. ГСИ респираторного тракта (бронхиты, пневмонии), в ЛОР-органах (отиты, ангины, тонзиллиты), желчевыводящих путей (холециститы), в органах зрения (конъюнктивиты), в мочеполовых органах (уретриты, нефриты, простатиты), опорно-двигательного аппарата (остеомиелиты, артриты).

4. Генерализация любой формы местного процесса может привести к септицемии и септикопиемии.

5. Пищевые ИНТОКСИКАЦИИ (отравления).

6. Синдром токсического шока («менструальный», после родов).

7. Синдром «ошпаренной кожи».

8. Инфицирование катетеров, протезов (эндокардиты, артриты).

S.epidermidis играет менее важную роль в патологии, но может являться причиной ГВП у лиц с ослабленным иммунитетом (эндокардиты, бактериемия, урогенитальные инфекции и др.).

Источник инфекции – больные и бактерионосители золотистых стафилококков.

Входные ворота – повреждённые кожа и слизистые оболочки.

Механизмы и пути передачи при экзогенной инфекции – аэрогенный, алиментарный, контактно-бытовой, инокуляционный при лечебно-диагностических манипуляциях.

Существенное значение имеет носительство патогенных золотистых стафилококков (особенно, на слизистой носа, зёва или на коже). Это связано с дефицитом местного иммунитета или наличием хронических очагов воспаления в организме.

Иммунитет – антимикробный и антитоксический (недолговременный и типоспецифический). Профилактика направлена на выявление носителей золотистых стафилококков, главным образом среди персонала больниц с целью их санации. Иногда – вакцинация беременных стафилококковым анатоксином (с целью повышения IgG у новорождённых). Также в профилактических целях проводится обработка ран и превентивная антибактериальная терапия (при хронических ангинах).

Лечение острых инфекций – антибиотики под контролем антибиотикограммы. При септических процессах вводят противостафилококковый донорский иммуноглобулин. Для лечения хронических инфекций применяют стафилококковый анатоксин и аутовакцину (стимуляции выработки антител).

ГЕРПЕСВИРУСЫ

HERPESVIRIDAE семейство

1. Alphaherpesvirinae подсемейство (короткий цикл репродукции, быстрый рост, вирусы размножаются в эпителиальных клетках, вызывая цитолитическую продуктивную инфекцию, а в нейронах – персистирующую (хроническую или латентную инфекции)

?Вирус простого герпеса 1 типа (ГВЧ-1): лабиальный герпес, острый гингивостоматит, герпес кожи и слизистых, офтальмогерпес, фарингит, герпетическая экзема, герпетический энцефалит, пневмонии, возможно, генитальный герпес также. Особенность – персистируют длительное время в задних рогах спинного мозга и узлах тройничного нерва и периодически при ослаблении иммунитета вызывают рецидивы.

?Вирус простого герпеса 2 типа (ГВЧ-2): генитальный герпес, неонатальный герпес, диссеминированный герпес, играет роль в этиологии рака шейки матки. Особенность – персистируют длительное время в ганглиях крестцового отдела спинного мозга.

?Вирус ветряной оспы – опоясывающего герпеса (Varicella-Zoster virus VZV) или ГВЧ-3: ветряная оспа, опоясывающий лишай (рецидив на фоне иммунодефицита).

2. Betaherpesvirinae подсемейство (медленная репродукция в клетках эпителия, почек, слюнных желез, гландах, персистенция в лимфоцитах и макрофагах)

?Цитомегаловирус ЦМВ (ГВЧ-5): цитомегаловирусная инфекция или цитомегалия (у взрослого здорового человека протекает бессимптомно, на фоне иммунодефицита или после трансплантации органов возникают генерализованные инфекции с поражением почек, мозга, печени, лёгких, также является); может приводить к врождённым аномалиям.

3. Gammaherpesvirinae подсемейство (репродукция в лимфобластоидных клетках, оказывают лимфопролиферативное действие, вызывают латентную инфекцию)

?Вирус Эпштейна-Барра ВЭБ или ВГЧ-4 (инфекционный мононуклеоз, лимфома Беркитта, назофарингеальная карцинома)

?Герпесвирусы человека тип 6 и 7 (синдром хронической усталости, эритема новорождённых)

?Герпесвирус человека тип 8 (Саркома Капоши, ассоциированная с ВИЧ-инфекцией и СПИДом)

Крупные и сложные оболочечные вирусы сферической формы. Геном представлен линейной двухнитевой ДНК. Типоспецифическими антигенами являются гликопротеины наружной оболочки.

Репродукция вируса происходит в ядре клетки (приводит к фрагментации хроматина и даже полному разрушению ядра). Индуцируют образование синцития.

По типу поражений чувствительных клеток выделяют:

1.      Продуктивная инфекция

2.      Персистентная инфекция (хроническая или латентная/бессимптомная) - инфекцию с длительным персистированием в лимфоидных тканях и нервной системе

3.      Трансформирующая инфекция (онкогенная трансформация заражённых клеток, особенно ВГЧ-2, ЭБВ, ВГЧ-8)

Единственный хозяин – человек.

Пути передачи: ВГЧ-1 (воздушно-капельный и контактный), ВГЧ-2 (половой), ветряная оспа (воздушно-капельный и реже контактный), цитомегалия (воздушно-капельный путь, или в младенчестве от матери, или со слюной, через кровь).

Существует живая ослабленная вакцина для профилактики ветряной оспы. Существуют инактивированные вакцины, многократное введение которых уменьшает частоту рецидивов герпетической инфекции. Вакцин при цитомегалии нет.

Диагностика инфекций простого герпеса

А) РАННЯЯ ДИАГНОСТИКА

1. Цитологический метод (соскоб из эпителия окрашивают по Романовскому-Гимзе и обнаруживают гигантские многоядерные клетки с внутриядерными включениями).

2. Экспресс-метод: РИФ для выявления антигенов.

3. Вирусологический метод: для выделения вируса используют

- куриные эмбрионы (заражают на хорион-аллантоисную оболочку, на которой появляются «оспины»)

- различные культуры клеток (типичное ЦПД – многоядерные клетки с внутриядерными включениями и круглоклеточная дегенерация)

- мышата-сосунки в мозг (гибель животных) или кролики в роговицу (кератит).

Идентификацию проводят в РН или РИФ.

Б) ПОЗДНЯЯ ИЛИ РЕТРОСПЕКТИВНАЯ ДИАГНОСТИКА

4. Серодиагностика (ИФА или РСК в парных сыворотках). Серодиагностика (РН, РСК, ИФА) ввиду значительной инфицированности популяции не представляет существенной диагностической ценности.

Вирусологическая диагностика ветряной оспы и опоясывающего лишая

1.      Выделение вируса в культуре клеток с последующей идентификацией в РСК.

2.      Серодиагностика – РСК (парные сыворотки).

3.      Вирусоскопия обрботанных по Морозову мазков из содержимого везикул (тельца Арагана).

Вирусологическая диагностика цитомегаловирусной инфекции

1.      Обнаружение крупных «цитомегаловирусных» клеток в моче и слюне.

2.      Выделение вируса из мочи, слюны, крови и ликвора (культура клеток с последующей идентификацией в РСК и РН).

3.      Серодиагностика (РСК, РН).