1)Иммуноблотинг (вестерн-блотинг).
Часто бывает, что АГ представляет собой сложную смесь разнородных молекул. С другой стороны, к такому комплексному АГ вырабатывается набор различных АТ. Для одновременного обнаружения различных фракций АГ либо АТ в исследуемом материале применяют метод вестерн-блотинга. В частности, он используется при диагностике ВИЧ-инфекции для обнаружения АТ к различным вирусным АГ. Для этого известный набор вирусных белковых АГ подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле. АГ мигрируют в геле в зависимости от их молекулярной массы и заряда. После окончания электрофореза на пластину с гелем накладывают лист нитроцеллюлозной мембраны (НЦМ) и проводят повторный электрофорез в поперечном направлении. АГ выходят из геля и прикрепляются к листу нитроцеллюлозной мембраны.
Далее лист НЦМ с отпечатками АГ (блот – отпечаток) обрабатывают сывороткой больного, содержащей АТ. Если АТ есть, то они связываются с НЦМ по месту локализации различных фракций АГ.
Далее метод не отличается от гетерогенного иммуноферментного анализа: НЦМ промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченные ферментом (пероксидазой). После инкубации и отмывания НЦМ
140
помещают в раствор субстрата (перекись водорода) и хромогена (диаминобензидин и др.) О количестве фракций антител к различным АГ фрагментам судят по появлению нескольких окрашенных пятен на НЦМ.
3)
|
ПИКОРНАВИРУСЫ (ЭНТЕРОВИРУСЫ) |
|
Picornaviridae Род Enterovirus (также Rhinovirus, Aphtovirus, Cardiovirus, Hepatavirus) Всего род энтеровирусов человека включает 68 серотипов, в том числе: - полиовирусы (3 серотипа); - Коксаки А (23 серотипа); - Коксаки В (6 серотипов); - ECHO (32 серотипа); - энтеровирусы человека: 68-71 (4 серотипа). |
|
Pазмер 22-30 нм (самые мелкие РНК-содержащие вирусы). Геном - однонитевая нефрагментированная позитивная РНК; отсутствие суперкапсида. Тип симметрии - кубический, количество капсомеров – 60. Устойчивость к эфиру (нет липидов); устойчивость к желчи, а также к кислотам и щелочам (в диапазоне рН от 3,0 до 10,0); устойчивость во внешней среде. Вирус полиомиелита сферической формы. Капсид состоит из четырех белков: - VP1, VP2, VP3 - образуют внешнюю поверхность капсида, - VP4 – внутренний капсидный белок, специфический рецептор вируса. Гемагглютинирующими свойствами вирион не обладает. По антигенным признакам вирусы полиомиелита подразделяются на три типа: I, II, III. Наибольшей патогенностью для человека обладает полиовирус I типа – он причина эпидемий. Полиовирус III типа вызывает спорадические случаи, редко - эпидемии. Полиовирусы II типа чаще вызывают инаппарантные формы инфекции. Важнейшим свойством полиовирусов является их тропизм к нервной ткани, они поражают двигательные клетки серого вещества спинного мозга, разрушая их. |
|
Эпидемиологические особенности вызываемых энтеровирусами болезней: 1) выраженная сезонность заболеваний (лето-осень); 2) фекально-оральный механизм распространения; 3) обнаружение вирусов в сточных водах; 4) выделение вируса из кишечника, носоглотки, ликвора и крови; 5) преимущественное поражение детей в возрасте до 12 лет; 6) широкое носительство среди здоровых людей. Источником полиомиелита является только человек. Основной механизм передачи - фекально-оральный. Воздушно-капельный способ заражения играет роль при эпидемических вспышках. Входные ворота при полиомиелите - слизистая оболочка полости рта и глотки. Основное место размножения -- эпителиальные клетки кишечника. |
|
Полиомиелит – воспаление серого вещества мозга. В течении болезни выделяют: 1. инкубационный период продолжительностью 7-14 дней; 2. продромальный период – 1-2 дня; 3. период острых проявлений; 4. период реконвалесценции (восстановительный, до 3 лет) 5. период резидуальных явлений (остаточные параличи). Различают 4 основные клинические формы полиомиелита: 1) инаппарантная (скрытая); 2) абортивная (малая болезнь); 3) непаралитическая (менингеальная), проявляющаяся серозным менингитом; 4) паралитический полиомиелит. Паралитическую форму в зависимости от локализации очага поражения разделяют на спинальную, бульбарную, понтинную (варолиев мост) и другие формы. Иммунитет стойкий. |
|
1. Вирусологический метод. Материал – фекалии, носоглоточные смывы, кровь. НЕ культивируют в эмбрионах или экспериментальных животных! Используют первичные или перевиваемые культуры клеток различных тканей человека и обезьян. Индикация – ЦПД (мелкозернистая дегенерация или феномен бляшкообразования. Идентификация – РН ЦПД в культуре ткани (для видимого эффекта используют ПРОБУ СОЛКА). Для установления типовых различий между штаммами используют методы молекулярной гибридизации, ПЦР, реакции с поликлональными и моноклональными сыворотками, секвенирование вирусного генома. 2. Серодиагностика. Используют РН в культуре ткани с парными сыворотками, полученными в острой стадии болезни и стадии реконвалесценции (РСК, ИФА). |
|
1. Инактивированная вакцина Солка. Вакцина вводится внутримышечно и вызывает выработку антител классов IgM и IgG. Предупреждает развитие паралитических форм болезни. 2. Живая вакцина из аттенуированных Себином штаммов полиовирусов 3 типов На пероральное введение живой вакцины вырабатываются иммуноглобулины трех классов – IgM, IgG и IgA, которые защищают слизистые от инфицирования «дикими» штаммами вируса, вытесняя их тем самым из циркуляции. |
|
ПИКОРНАВИРУСЫ (Коксаки и ЭКХО) |
|
Вирусы Коксаки по характеру патогенного действия на мышат-сосунков разделены на две группы: 1. группа Коксаки А - вызывают диффузный миозит с воспалением и некрозом поперечнополосатых мышц (23 сероварианта); 2. группа Коксаки В - поражения ЦНС, некроз скелетной мускулатуры, миокарда, воспалительные поражения селезенки (6 серовариантов). Группа ECHO насчитывает 32 типа вирусов. Отличаются от вирусов полиомиелита отсутствием патогенности для обезьян, а от вирусов Коксаки – отсутствием патогенности для новорожденных мышей. Все они размножаются в культуре клеток почек обезьян и перевиваемых клетках амниона человека. |
|
Единственным хозяином вируса в природе является человек. Основной механизм передачи – фекально-оральный, вирус может распространяться и воздушно-капельным путем. Вирусы могут длительно выживать в канализационных водах, на предметах обихода, в пищевых продуктах. Иммунитет типоспецифический. Вакцин нет. |
|
Патогенез заболеваний, вызываемых вирусами Коксаки и ECHO, сходен с патогенезом полиомиелита. Входные ворота -- слизистая оболочка носа, глотки, тонкого кишечника, где в эпителиальных клетках, в лимфоидной ткани происходит размножение этих вирусов. Сродство к лимфоидной ткани - характерная особенность этих вирусов. Вирусы Коксаки А и В и вирусы ECHO могут вызывать у человека : - Полиомиелитоподобные заболевания, - Асептический менингит, миелиты (вирусы Коксаки А и В; ECHO) - Эпидемическая миалгия - Борнхольмская болезнь (вирусы Коксаки А и В; ECHO) - Герпангина (Коксаки А и Коксаки В) - Энцефаломиокардиты новорожденных ( Коксаки В ).Летальность при этой форме инфекции – 60-80%. Кроме того Коксаки и ЕСНО вызывают: малую болезнь или летний грипп, гастроэнтериты, кореподобные и краснухоподобные экзантемы, острые респираторные заболевания, миокардиты. |
|
1. Вирусологический метод. Материал для исследования: фекалии, смывы и мазки из носоглотки, кровь, при асептических менингитах – цереброспинальная жидкость, в случае смерти больного исследуют кусочки ткани из разных органов. Заражают культуры клеток (полиовирусы, ECHO, Коксаки В и некоторые серовары Коксаки А), а также новорожденных мышей (Коксаки А). Идентификация вирусов – РИФ, РН, РТГА для гемагглютинирующих вирусов. 2. Серологическая диагностика Используют РН, РТГА, РСК, реакции преципитации в парных сыворотках от каждого больного. |
