Фиксированные на пламени мазки окрашивают по методу Козловского 2% водным раствором сафранин, после промывания водой, окрашивают 0,75-1% водным раствором малахитовой зелени 0,5- 1 мин. Бруцеллы при этом окрашиваются в красноватый цвет, посторонние микробы, находящиеся в материале, - в зеленый. По методу Шуляка фиксированный мазок окрашивают 2 мин. карболфуксином (1:5), слегка промывают и докрашивают 2% водным раствором метиленовой сини – 3-5 мин.
Выделение чистой культуры
Культуральные свойства. Культивируются в аэробных условиях при оптимальной температуре 36°С и рН 6,8-7,2. При температуре выше 45°С и ниже 6°С роста не наблюдается. В первых генерациях, выделяемых из патологического материала, растут медленно, в течение 1-3 недели; лабораторные культуры вырастают через 24-48 ч. Растут на простых питательных средах. Элективной питательной средой являются мясопептонный печеночный бульон, мясопептонный печеночно-глюкозно-глицериновый агар, печеночно-глюкозный глицериновый бульон и агар. В жидких средах при росте бруцелл наблюдается помутнение, на плотных средах колонии разной величины, выпуклые, бесцветные, с перламутровым оттенком. Встречаются колонии в S- и R-формах. Вирулентные типичные штаммы (S-форма) на поверхности агара образуют мелкие, 2-3 мм в диаметре, круглые, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями, прозрачные с голубоватым оттенком колонии; в бульоне - слабое равномерное помутнение и пристеночное кольцо, в дальнейшем - небольшой осадок. Авирулентые варианты (R-форма) на агаре образуют шероховатые колонии, в бульоне - неравномерное помутнение с просветлением и крошковатым осадком.
С точки зрения биохимических свойств, бруцеллы обладают слабой сахаролитической активностью, сбраживая иногда глюкозу и арабинозу с выделением кислоты. Не разжижают желатин, не свертывают молоко, B. suis образуют сероводород и аммиак при ферментации белковых субстратов. B. melitensis не образует сероводород. Некоторые штаммы бруцелл обладают уреазной, каталазной (кроме B. melitensis) дегидрогеназной, цитохромоксидазной активностью. Культуры бруцелл видов B. abortus и B. melitensis не обладают адениндезаминазной активностью. Патогенные виды бруцелл отличаются по способности воспринимать анилиновые красители.
Биопрепараты
- Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК И РДСК из культуры вакцинного штамма №82
- Антиген для кольцевой реакции с молоком: микробную массу культуры B. Abortus (штамм №19) готовят, как единого бруцеллезного антигена, инактивируют, устанавливают необходимую концентрацию микробных клеток, протравливают сульфатом железа, окрашивают в синий цвет гематоксилином, контролируют на стерильность, специфичность и активность.
- Флуоресцирующую бруцеллезную сыворотку готовят из позитивной бруцеллезной сыворотки, глобулины которой метят флуоресцеинизотиоцианатом.
- Позитивную бруцеллезную сыворотку получают гипериммунизацией животных-продуцентов. Используют для контроля при постановке серологических реакций (РА, РСК и др.), а также серологической идентификации бруцелл.
- Диагностический аллерген - бруцеллин представляет собой стерильную, прозрачную, желтого цвета жидкость, которая содержит продукты жизнедеятельности бруцелл и вещества, извлеченные из них. Бактериальную массу выращивают (штамм В. abortus В-1) на агаровой среде, прогревают при 105-110°С 1ч, центрифугируют, надосадочную жидкость стерилизуют фильтрованием, бактериальную массу ресуспендируют в физиологическом растворе. Процедуру нагревания, центрифугирования и стерилизации повторяют, впоследствии чего оба фильтрата соединяют. Полученный препарат контролируют
