При изучении, идентификации и классификации микроорганизмов чаще всего изучают следующие характеристики:
1.Морфологические - форма, величина, особенности взаиморасположения, структура.
2.Тинкториальные - отношение к различным красителям (характер окрашивания), прежде всего к окраске по Граму. По этому признаку все микроорганизмы делят на грамположительные и грамотрицательные.
Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение.
При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые) : Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы.
Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.
Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.
Механизм и этапы окраски по Граму:
1. На фиксированный мазок нанести раствор генцианового фиолетового, Через 1-2 мин краситель слить.
2. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин (йод)
3. Обесцветить этиловым спиртом в течении 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Промыть водой
5. Докрасить водным р-ом фуксина в течении 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.
* Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.
Методы лабораторной диагностики инфекционных агентов :
1. Микроскопический- с использованием приборов для микроскопии. Определяют форму, размеры, взаиморасположение микроорганизмов, их структуру, способность окрашиваться определенными красителями.
К основным способам микроскопии можно отнести световую микроскопию (с разновидностями- иммерсионная, темнопольная, фазово - контрастная, люминесцентная и др.) и электронную микроскопию. К этим методам можно также отнести авторадиографию (изотопный метод выявления).
2.Микробиологический (бактериологический и вирусологический) - выделение чистой культуры и ее идентификация.
3.Биологический - заражение лабораторных животных с воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях (биопроба).
4.Иммунологический ( варианты - серологический, аллергологический) - используется для выявления антигенов возбудителя или антител к ним.
5.Молекулярно- генетический - ДНК- и РНК- зонды, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и многие другие.
