Аллергические пробы - биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.
Этот метод основан на введении специфического аллергена. У молодняка крупного рогатого скота для этой цели используется абортин, а у овец, коз и свиней—бруцеллизат.
Абортин представляет собой эмульсию бруцелл в физиологическом растворе, убитых кипячением, и содержит2 миллиарда микробных тел по оптическому стандарту в 1 мл.
Абортин вводится молодняку крупного рогатого скота в возрасте до 1 года внутрикожно на средине внутренней поверхности одной из подхвостовых складок в дозе 0,2 мл. Следует учесть, что при введении эмульсии под кожу даже у заведомо больных животных местная реакция не возникает, а также учесть возникновение неспецифической реакции вследствие раздражения тканей, исчезающей в первые 48 часов.
Положительная реакция на бруцеллез становится ясно выраженной через 48—72 часа. Оценка производится путем ощупывания складки и сравнения ее со второй складкой, в которую аллерген не вводился.
Положительная реакция характеризуется появлением на месте введения абортина отечности с уплотнением в центре, которая выявляется осмотром, но лучше пальпацией, отечность имеет различную интенсивность.
Сомнительная реакция считается в том случае, когда имеется слабо выраженный отек, выявляемый преимущественно при пальпации при сравнении с другой складкой, или же уплотнение величиной с горошину без выраженного отека на месте введения абортина. Отрицательным результатом считается отсутствие каких-либо изменений на месте введения абортина.
Все животные, давшие сомнительную реакцию, выделяются в отдельную группу и через месяц подвергаются вторичному исследованию. Абортин вводится в другую хвостовую складку. Животные, вторично давшие сомнительную реакцию, выделяются в группу положительных.
Бруцеллизат используется для диагностики бруцеллеза главным образом у овец.
Бруцеллизат представляет собой бесцветный прозрачный раствор специфических веществ, извлеченных из высушенных и размолотых бруцелл, путем экстракции слабощелочным изотоническим раствором хлорида натрия. Специфические вещества бруцеллизата связаны преимущественно с бактериопро-теином. Бруцеллизат не вызывает сенсибилизации, а потому может быть использован для повторного введения тому же самому животному через месяц после первого введения препарата.
Бруцеллизат вводится строго внутрикожно в подхвостовую складку или же в бесшерстный участок в области локтевого сустава. Кожа предварительно дезинфицируется, и бруцеллизат вводится с соблюдением правил асептики: иглы кипятятся и для каждой овцы используется отдельная игла.
У больных бруцеллезом овец после введения бруцеллизата в срок от 24 до 48 часов появляется на месте инъекции отек и краснота. Первый учет реакции производится через 24 часа и второй через 48 часов. Реагирующих животных признают больными и сейчас же выделяют из стада.
Резко положительная реакция характеризуется появлением на месте введения препарата отечности, хорошо различимой при внешнем осмотре. При положительной реакции отечность выражена несколько меньше. Слабоположительная реакция выявляется только пальпацией. Сомнительная реакция характеризуется слабо выраженным отеком, который обнаруживается при пальпации и при сравнении с другой складкой.
Овцы, давшие сомнительную реакцию на бруцеллизат, выделяются в отдельную группу и подлежат проверке через 30 дней. У здоровых животных после введения бруцеллизата местная реакция отсутствует совершенно.
Бруцеллизат обладает высокой чувствительностью и является специфическим диагностическим препаратом для распознавания бруцеллеза овец.
В настоящее время разработаны тесты для определения сенсибилизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, тканевых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворотке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, специфическое розеткообразование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, а также аллергосорбентные методы (определение специфических IgE в сыворотке крови) .
Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) . РТМЛ основана на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизированными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ) . В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов периферической крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических факторов — аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза — митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества) .
Реакция специфического розеткообразования. Розетки — характерные образования, возникающие in vitro в результате прилипания эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток.
Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спонтанное розеткообразование здоровых людей составляет 52 — 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствующие аллергены.
Реакция дегрануляции тканевых базофилов. Методика основана на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизированных цитофильными AT из сыворотки крови больного.
Базофильный тест Шелли. Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присутствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент.
Определение антител класса IgE in vitro. Лабораторная диагностика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgEанти-IgE.
При использовании радиоактивной метки метод носит название радиоаллергосорбентного теста (PACT) , но чаще в качестве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ) . Время анализа — 6 — 7 часов. Принцип метода: фиксированный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сывороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфические IgEанти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специфическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.
