Методика определения сводится к следующему. Точными объемами исследуемого вируссодержащего материала заражают несколько культур клеток в куриных эмбрионов на ХАО. Затем подсчитывают количество бляшек в каждом матрасе и количество оспин в каждом курином эмбрионе. Рассчитывают среднее арифметическое. Оно точно равно количеству БОЕ или вирусом в культуре клеток
00Е вируса. Поскольку объем заражающей дозы точно известен, нетрудно рассчитать, сколько БОЕ или ООЕ приходится на единицу объема вируссодержащего материала. Это и будет титром
вируса в материале.
Например, вируссодержащим материалом в разведении 10_3 заразили 5 эмбрионов и получили 10, 13, 6, 9 и 10 оспин. Среднее арифметическое суммы составит 9,6. Титр вируса в ООЕ определяют по формуле:
Т = — = —^Ц- = 48000 ООЕ/0,2 мл, Уп 0,2 • 10
где а — среднее количество подсчитанных оспин; V — объем вируссодержащего материала, использованного для заражения; п — степень разведения вируссодержащего материала. Следовательно, исходя из наших расчетов, в 0,2 мл вируссодержащего материала в разведении 10~3содержится 48000 оспинообразующих единиц.
Этот пример титрования вирусов является упрощенным, так как он не учитывает случаев высокой концентрации вируса в материале, при которой бляшки или оспины могут сливаться между собой, и их невозможно будет сосчитать. Обычно счету поддаются бляшки и оспины, количество которых не превышает 50 на матрас или ХАО. Поскольку титр вируса в исследуемом материале обычно не известен (он подлежит определению),то неизвестно, в каком разведении надо брать материал для заражения, чтобы избежать слияния бляшек или оспин.
В этом случае готовят десятикратные разведения вируссодержащего материала (Ю-1, 10-2, 10"^ и т.д.) и каждым разведением заражают равные группы культур клеток или куриных эмбрионов. Подсчитывают количество бляшек или оспин, рассчитывают среднее арифметическое. Титр вируса находят, по формуле:
т _ аг+а2 + ... + ап V(nx +п2 + — + пл)'
Метод титрования вирусов в БОЕ дает наиболее достоверные данные об их концентрации, но могут возникнуть технические трудности, связанные с получением и подсчетом бляшек. Что касается оспин, то их использование для титрования ограничивается довольно немногочисленными вирусами, способными образовывать узелки на ХАО куриных эмбрионов.
