В слое агара равномерной толщины на определенном расстоянии друг от друга делают лунки для антигена или антисыворотки. После внесения растворов в лунку эти компоненты начинают диффундировать радиально в гель. Встречаясь друг с другом, антигены и антитела начинают образовывать иммунные комплексы, которые преципитируют в ячейках геля и становятся видимыми как линии преципитации. Двойную радиальную иммунодиффузию проводят на предметных стеклах (микрометод). В зависимости от характера иммунохимических исследований в агаре делают лунки для антигена или антитела при помощи готовых штампов или вырезают их стеклянной (можно металлической) трубочкой. Лунки должны отстоять друг от друга по меньшей мере на 4 мм. После внесения растворов иммунодиффузию проводят во влажной камере при температуре 4°, 20° или 37 °С. Продолжительность диффузии зависит от целей исследования, она должна быть не менее 24 ч и в некоторых случаях может достигать 6—7 дней. Более продолжительная инкубация не приводит к изменениям преципитатов. В случае продолжительной иммунодиффузии пластины следует ежедневно контролировать.
Оценка результатов.
Количество линий преципитации. Во множественных системах всегда существует вероятность того, что два или более комплекса антиген-антитело вследствие одинаковой скорости диффузии будут образовываться в одном и том же участке геля, формируя, следовательно, одну линию преципитации. Кроме того, концентрация антител и антигенов или соотношение компонентов реакции может быть настолько неблагоприятным, что видимые преципитаты не будут образовываться. Поэтому число видимых линий преципитацпи, как правило, меньше числа систем антиген-антитело или в лучшем случае равно ему.
Расположение преципитатов между лунками. При оптимальном соотношении между антигенами и антителами после окончания диффузии линия преципитации располагается примерно на середине расстояния между лунками. Если один из компонентов реакции присутствует в большем количестве, чем другой, то линия преципитации сдвигается в сторону лунки с меньшим содержанием реагента. Если соотношение концентраций реагентов может измениться в месте первичного выпадения предметов, например, вследствие избыточного поступления одного из компонентов, это приводит к смещению линии преципитации. Часть иммунных агрегатов, особенно в зоне избытка антител, может оставаться на старом месте в виде вуали и расширения линии преципитации. Именно возможность возникновения таких процессов обусловливает необходимость ежедневных проверок пластин геля при длительно протекающейиммунодиффузии.
