Инвазивные методы исследования — это методы, основанные на введении веществ в полость организма - внутримышечно, внутривенно или с повреждением кожного покрова, слизистых оболочек.
Во избежание контакта с атмосферным воздухом при исследовании образцы клинического материала получают с использованием инвазивных методов забора (пунктаты закрытых полостей – синовиальной, перитонеальной, плевральной, перикардиальной, суставной жидкостей; пункционные и тканевые биопсии; кровь; пункционная моча; пунктатыабсцессов; костный мозг).
В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза зависит: правильность взятия пат. материала, его транспортировки; качественное приготовление; техника исследования вируссодержащего материала, который имеет свои особенности.
Материал для исследования требуется брать как можно быстрее, не позднее 2-3 ч. после смерти. И при первых признаках заболевания 1-2 дня, т.к. проникают другие бактерии из-за ослабления барьера.
При взятии материала необходимо исходить из патогенеза изученной инфекции. При нейротропных – кусочки головного и спинного мозга. При респираторных – выделения из носа. Материалом для выделения вируса может служить различные экскреты и секреты. Для выделения вируса может быть использована кровь 3х видов. 1. Дефибринированная (удален фибрин) 2. «Ласковая» кровь (с дист. H2O1:1) 3. Отдельные элементы крови (эритроциты, лейкоциты и т.д.) Для обнаружения противовирусных антител кровь берут в виде парных сывороток через 2-3 недели берут просто повторно. Но к этому времени 1 пробу нужно сохранить в объеме 5 мл.
Стерильный материал погружают во флаконы. Мочу собирают при помощи катетора в стерильную посуду. Фекалии прямо из прямой кишки шпателем, палочкой. Везикула – шприцом (обычно содержат серозную жидкость) После смерти важно быстрее взять кусочки органов – аутостерилизация, заражение посторонней микрофлоры, которые выделяет патологический вирус. В качестве пат. материала Кусочки органов 10-20 г. Имеют отклонения по форме и др. могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины. Наиболее часто вирус локализуется в печени, селезенке, легких, головном мозге, почках, лимфоузлах.
Патологический материал необходимо брать стерильными инструментами в стерильную посуду. Поверхность органа (ткани), от которого берут патологический материал, на месте разреза следует обжечь над пламенем или прижечь нагретой металлической пластинкой.
Материал, направляемый для вирусологических исследований, консервируют 30-50%-ным раствором химически чистого глицерина на физиологическом растворе поваренной соли. Физиологический раствор предварительно стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 30 минут. Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал для бактериологического и вирусологического исследований посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или во флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками.
Взятие крови для серологического исследования
У лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи. Иглы перед взятием крови от каждого животного обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, и кожу дезинфицируют спиртом: или 3%-ным раствором карболовой кислоты. Нужно следить, чтобы кровь стекала по стенке в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, скорее гемолизуется и часто дает неправильные результаты показаний при исследовании. Нельзя допускать, чтобы кровь попадала на землю. Для этого надо пользоваться тазиком с дезинфицирующей жидкостью, куда спускают первую порцию крови. У свиней кровь берут из уха (иглой или шприцем) или из кончика хвоста. Хвост предварительно обмывают водой с мылом и дезинфицируют спиртом или 3%-ным раствором карболовой кислоты, а затем кончик отрезают ножницами. После взятия крови кончик хвоста обрабатывают йодом, перевязывают или прижигают. У птиц кровь берут из вены крыла или из гребешка.
Брать кровь надо по возможности утром, до кормления животных. Для серологического исследования от крупного рогатого скота, лошадей и других крупных животных, овец, свиней кровь берут в количестве 7-10 мл.
Взятую кровь выдерживают около часа при 30-35°С для свертывания, а затем выносят в прохладное помещение для отстаивания. Через 10-12 часов отстоявшуюся сыворотку переливают в другие пробирки. Если сыворотка недостаточно отстоялась или верхний слой сгустка плотно прилегает к стенкам пробирки и отстаивание начинается снизу, то сгусток отделяют от стенок пробирки тонкой предварительно прокаленной и остывшей проволокой.
Сыворотка крови должна быть доставлена в лабораторию в течение первых суток и в исключительных случаях не позднее третьего дня после взятия крови.
При пересылке сыворотки на большое расстояние, особенно летом, её необходимо консервировать 5%-ным раствором карболовой кислоты на физиологическом растворе из расчета на каждые 9 мл сыворотки 1 мл раствора карболовой кислоты или 1-2 капли раствора на 1 мл сыворотки.
Для серологического исследования в лабораторию можно отправлять и цельную кровь, не отделяя сыворотку, но при условии, что в пути ее не будут встряхивать и она не подвергнется гемолизу.
На каждой пробе сыворотки или крови указывают ее номер или кличку животного, или фамилию владельца животного. Пробы направляют с описью в двух экземплярах.
Пробирки с сыворотками плотно закрывают стерильными пробками и устанавливают для пересылки в строго вертикальном положении.
Зимой сыворотки упаковывают и пересылают так, чтобы они не замерзали.
