Для заражения вируссодержащим материалом отбирают пробирки с наличием сплошного клеточного монослоя, просматривая их под малым увеличением микроскопа. Питательную среду удаляют и в каждую пробирку вносят по 0,1-0.2 мл вируссодержащего материала, подлежащего исследованию, оставляя ее в наклонном положении. После 30-60 мин контакта материала с клетками в пробирки добавляют 1-1,5 мл поддерживающей (без сыворотки) среды. Для каждой пробы вируссодержащего материала используют не менее 4 пробирок с культурой клетки. Каждое исследование сопровождается контролем:
1.Контроль монослоя в норме. Из пробирок удаляют ростовую питательную среду и заменяют ее поддерживающей.
2.Контроль монослоя, инфицированного эталонными штаммами вирусов.
3.Контроль монослоя контактировавшего с экстрактом аналогичной ткани, не зараженной вирусом.
Контакт вируса с восприимчивыми клетками сопровождается острой или латентной инфекцией. При инфекции отмечают деструктивные изменения в зараженной клетке, часто приводящие к гибели. Все морфологические изменения в клетке, возникающие под действием вируса, называют цитопатичеким действием. При латентной инфекции репродукция вируса в зараженной клетке не приводит к ее гибели, и внешне клетка не отличается от нормальной.
1. Первоначальный этап взаимодействия вируса с клеткой –это изменение некоторых звеньев обмена веществ (увеличение размеров ядра, дезинтегративное набухание).
2. Второй этап-специфический. Одна из его особенностей появление характерного ЦПД вируса (цитопатическое действие вирусов). При этом некоторые вирусы (аденовирусы) поражают ядра клеток, другие – цитоплазму (вирус гриппа), третьи же разрушают и ядро и цитоплазму.
Морфологические изменения при острой инфекции:
1.Округление клеток (они принимают шаровидную форму, отделяются от стекла и свободно плавают в культуральнойжидкости).
2.Появление в цитоплазме пораженных клеток мелкой зернистности.
3.Увеличение в размерах этой зернистости и появление внутриклеточных включений.
4.Очаговые скопления округлившихся клеток в виде гроздьев винограда
5.Образование гигантских многоядерных клеток – симпластов и синцитиев.
6.Появление в монослое «стерильных пятен» -участков без клеток.
7.Полное «сползание» клеток со стекла.
