Споры служат для размножения и сохранения организмов в неблагоприятных условиях, а у бактерий — только для выживания в неблагоприятных условиях
Споры у бактерий служат только для сохранения и выживания организма в неблагоприятных условиях (тогда как у грибов, например, споры служат еще и для размножения). В состоянии споры бактерия может оставаться жизнеспособной десятки лет.
Споры у большинства бактерий образуется и располагаются внутриклеточно - это, так называемая, эндоспора. Бактерия, которая образовала эндоспору, называется спорангий.
У некоторых бактерий могут образовываться экзоспоры (только у метанокисляющих бактерий) и цисты (шарообразная клетка, у некоторых видов Азотобактерий). Это тоже покоящиеся формы, но в этом случае сама бактерия как будто покрывается защитной оболочкой, а не образует спору внутри себя.
СПОРЫ. Эндоспоры бактерий выдерживают длительное кипячение, действие горячего воздуха (140–150°С) и химических дезинфицирующих веществ, многие годы сохраняются в почве, на растительности и предметах. Попадая в организм человека и животных, споры патогенных бактерий прорастают в материнские клетки за несколько часов.
Водным фуксином, водно–спиртовым метиленовым синим и по Граму эндоспоры не окрашиваются, так как их плотная многослойная оболочка непроницаема для обычных красителей. В мазках из патологических материалов, культур бацилл и клостридии, окрашенных простыми красителями, споры выглядят в виде бесцветных телец внутри окрашенных в соответствующий цвет вегетативных клеток или вне их. Окрашивать их можно по методу Циля–Нельсена, используя для обесцвечивания мазков после обработки их фуксином Циля не 5%, а 1% серную кислоту. При этом эндоспоры, так же как микобактерии туберкулеза, красятся в розовый цвет и будут хорошо видны на синем фоне бактерий. Для окрашивания спор можно использовать метод по ОЖЕШКО: 1) протравка оболочки споры горячей кислотой; 2) окраска по Цилю–Нильсену.
Способ Ожешки. 1. На высушенный нефиксированный препарат наливают 0,5%-ный раствор соляной кислоты и подогревают до выделения паров 1–2 мин. Затем, остудив, сливают кислоту, отмывают водой, сушат на воздухе, фиксируют на пламени.
2. На фиксированный препарат накладывают фильтровальную бумагу, на которую наливают карболовый фуксин Циля и подогревают в течение 1 мин до появления пара. По мере испарения добавляют краску, не давая ей подсохнуть на препарате; затем краску сливают, а препарат промывают водой.
3. Обесцвечивают быстрым погружением в 1,5% -ный раствор кислоты (серной, соляной, азотной, уксусной) или 33%-ный раствор этилового спирта.
Время выдержки в кислоте или спирте с целью обесцвечивания зависит от препарата и колеблется от нескольких секунд до нескольких минут. Это время определяют опытным путем, вынимая препарат из кислоты, промывая водой и просматривая его под микроскопом при помощи сильной сухой системы. Вегетативные клетки должны быть почти бесцветными или иметь чуть заметный розовый оттенок.
4. Препарат дополнительно окрашивают метиленовой синью в течение 1–2 мин и тщательно промывают водой. Указанным методом споры окрашиваются в яркий рубиново-красный цвет, а вегетативные клетки – в синий или лиловый.
Способ Пешкова. 1. На фиксированный на пламени или спиртформолом мазок наливают метиленовую синь Леффлера и доводят ее до кипения, держа над пламенем горелки, кипятят 15–20 сек.
2. Промывают водой и докрашивают в течение 30 сек 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного. Снова промывают, подсушивают и исследуют под масляной иммерсией микроскопа. Споры голубые или синие. Протоплазма вегетативных форм розовая.
Способ Дорнера. 1. Приготовляют в небольшой пробирке в двух-трех каплях дистиллированной воды густую взвесь бактерий.
2. Добавляют равное количество отфильтрованного карболового фуксина Циля.
3. Пробирку помещают в кипящую баню на 10 мин и более.
4. На предметном или покровном стекле смешивают одну петлю окрашенного материала с одной петлей раствора нигрозина Дорнера (10 г водорастворимого нигрозина растворяют в 100 мл дистиллированной воды и кипятят на водяной бане в течение 30 мин. Затем к раствору добавляют 0,5 мл формалина. Раствор дважды фильтруют).
5. Делают очень тонкий мазок и быстро высушивают его на воздухе.
В результате примененной методики споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки остаются неокрашенными, фон серый.
