пользователей: 30398
предметов: 12406
вопросов: 234839
Конспект-online
РЕГИСТРАЦИЯ ЭКСКУРСИЯ

7.Возбудители кампилобактериоза. Био и серо диагностика.(ТЕТРАДЬ)

Кампилобактериоз - инфекционная болезнь, проявляющаяся у млекопитающих в виде абортов, временного бесплодия, задержания последа, вагинитов, метритов, рождения нежизнеспособного молодняка; у кур - снижения прироста массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падежа цыплят.

  • заражение происходит половым путем или алиментарно;
  • основное место локализации – половые органы;
  • фактор вирулентности – термостабильный эндотоксин.

  Бактериологическая диагностика.

  1. Материал для исследования:
    • аборотированный плод с оболочками или голова, желудок, печень, легкие плода, часть плаценты;
    • от коров - слизь из шейки матки или цервикально-вагинальной области;
    • от быков - препуциальная слизь, сперма, секрет придаточных половых желез;
    • от убитых с диагностической целью животных - матка, яичники, влагалище, лимфоузлы тазовой полости.
  2. Микроскопия.
    1. методы окраски:
      разведенным 1:5 карболовым фуксином Циля 1-2 мин.
    2. микрокартина:
      полиморфные, тонкие, изогнутые палочки в виде запятой, летящей чайки, буквы V, спирали с одним или несколькими завитками, длиной 0,5-8 и толщиной 0,2-0,8 мкм.
    3. грамотрицательны;
    4. спор не образуют;
    5. капсул не образуют;
    6. подвижны.
  3. Культивирование.
    • посев на питательные среды: полужидкий 0,15-0,2 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), 2-3 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (МППА), сафранино-железоновобиоциновая среда (СЖН), агар Мартена и среда Китта-Тароцци без масла.
    • особенности выделения возбудителя:
      • микроаэрофилы (в атмосфере 10-15% СО2) или анаэробы;
      • оптимальная температура 37-38oС;
      • срок культивирования до 10 дней.
    • культуральные свойства:
      • на ПЖА через рост в пробирке около самой поверхности среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм;
      • на плотной среде - нежный мелкоросинчатый налет или отдельные голубоватые мельчайшие колонии;
      • на СЖН при росте чистой культуры розовый цвет среды не изменяется, при смешанном росте или размножении только других видов микробов среда становится ярко-желтой.
    • биохимические свойства:
      не ферментируют углеводы и мочевину, дезаминируют глутаминовую и аспарагиновую кислоты, оксидазоположительны, индол не выделяют. Образуют сероводород, за исключением подвида С. fetus venerealis. Желатин не разжижают, молоко не свертывают. Реакции с метиловым красным и Фогеса - Проскауэра отрицательны. Подвиды С. fetus синтезируют каталазу и не редуцируют нитраты.
  4. Биопроба.
    Заражают подкожно, внутрибрюшинно, интравагинально или орально двух беременных морских свинок или четырех небеременных белых мышей. У морских свинок происходят аборты.
  5. Устойчивость.
    В сене, подстилке, навозе, почве, воде кампилобактеры остаются жизнеспособными при температуре 18-27 °С до 20 дней, при 6 °С - до 1 мес; в гниющем материале разрушаются быстро. В инфицированных тканях матки и плодов при температуре минус 20 °С сохраняются 5-8 мес. Высушивание их убивает через 3 ч, при 55 °С гибнут в течение 10 мин.Растворы едких щелочей, хлорной извести, свежегашеной извести в концентрациях, применяемых для дезинфекции, убивают их за 5-10 мин.
  6. Иммунитет.
    Переболевшие кампилобактериозом животные приобретают прочный иммунитет.

 

РА с влагалищной слизью коров и телок (РАВС). Она основана на обнаружении в слизи агглютининов с помощью кампилобактериозного антигена. Агглютинины появляются в слизи через 1,5 - 4 месяца с начала заражения. У абортировавших на почве кампилобактериоза коров их обнаруживают в первые дни после аборта.

Слизь берут на марлевый тампон. Его готовят из бинта длиной 10 - 12 см, сворачивают до размера сливы, перевязывают ниткой, а затем ее наматывают на тампон и помещают в пробирку, конец нитки фиксируют пробкой. Тампоны стерилизуют в автоклаве.

Перед реакцией тампоны со слизью отжимают и выбрасывают. В необходимых случаях экстракт слизи фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют в течение 20 - 30 минут при 3000 об./мин.

Реакцию ставят в четырех разведениях в объеме 1 мл. Во вторую, третью, четвертую пробирки наливают 3-процентный раствор хлористого натрия с 0,3% формалина. Экстракт слизи разливают в первую и вторую пробирки по 0,5 мл. Содержимое второй пробирки перемешивают и 0,5 мл переносят в третью пробирку, из третьей - в четвертую, а из нее 0,5 мл смеси удаляют.

Во все четыре пробирки вносят по 0,5 мл стандартного кампилобактериального антигена с 1 млрд. концентрацией микробных клеток.

Контроли к реакции:

1. На самоагглютинацию. К 0,5 мл антигена добавляют 0,5 мл формалинизированного 3-процентного раствора поваренной соли.

2. На активность. В каждое разведение типоспецифической сыворотки от 1:50 до 1:400 добавляют 0,5 мл испытуемого антигена.

3. На специфичность. В разведения нормальной сыворотки кролика 1:100 и 1:200 вносят по 0,5 мл того же антигена.

Пробирки опыта и контроля встряхивают и ставят на сутки в термостат, а затем выдерживают при комнатной температуре в течение 3 - 4 часов. Учет реакции начинают с контролей. При правильном ходе реакции контроли 1 и 3 должны быть отрицательными, а второй - положительным. После этого учитывают ход реакций в опыте.

Положительная реакция: ++++ или +++ (4 или 3 креста) - полное просветление жидкости во всех пробирках или только в первой и второй и неполное просветление в третьей и четвертой пробирках. На дне образуется рыхлый осадок, который при встряхивании разбивается в мелкие хлопья.

Сомнительная реакция: ++ или + (2 или 1 крест) - неполное просветление жидкости в первой и второй пробирках, небольшое количество осадка на дне их.

Отрицательная реакция (-) - феномен агглютинации отсутствует во всех четырех пробирках.

Реакция агглютинации с сывороткой крови и молока не применяется для диагностики кампилобактериоза.

Положительная РАВС подтверждает наличие кампилобактериоза в стаде, но по ней нельзя ставить диагноз на это заболевание. Для этого нужно выделить культуру возбудителя болезни.

 


23.01.2016; 10:03
хиты: 158
рейтинг:0
Естественные науки
науки о жизни
микробиология
для добавления комментариев необходимо авторизироваться.
  Copyright © 2013-2024. All Rights Reserved. помощь