Кампилобактериоз - инфекционная болезнь, проявляющаяся у млекопитающих в виде абортов, временного бесплодия, задержания последа, вагинитов, метритов, рождения нежизнеспособного молодняка; у кур - снижения прироста массы бройлеров, яйценоскости кур-несушек и падежа цыплят.
- заражение происходит половым путем или алиментарно;
- основное место локализации – половые органы;
- фактор вирулентности – термостабильный эндотоксин.
Бактериологическая диагностика.
- Материал для исследования:
- аборотированный плод с оболочками или голова, желудок, печень, легкие плода, часть плаценты;
- от коров - слизь из шейки матки или цервикально-вагинальной области;
- от быков - препуциальная слизь, сперма, секрет придаточных половых желез;
- от убитых с диагностической целью животных - матка, яичники, влагалище, лимфоузлы тазовой полости.
- Микроскопия.
- методы окраски:
разведенным 1:5 карболовым фуксином Циля 1-2 мин. - микрокартина:
полиморфные, тонкие, изогнутые палочки в виде запятой, летящей чайки, буквы V, спирали с одним или несколькими завитками, длиной 0,5-8 и толщиной 0,2-0,8 мкм. - грамотрицательны;
- спор не образуют;
- капсул не образуют;
- подвижны.
- методы окраски:
- Культивирование.
- посев на питательные среды: полужидкий 0,15-0,2 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), 2-3 %-ный мясо-печеночный пептонный агар (МППА), сафранино-железоновобиоциновая среда (СЖН), агар Мартена и среда Китта-Тароцци без масла.
- особенности выделения возбудителя:
- микроаэрофилы (в атмосфере 10-15% СО2) или анаэробы;
- оптимальная температура 37-38oС;
- срок культивирования до 10 дней.
- культуральные свойства:
- на ПЖА через рост в пробирке около самой поверхности среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм;
- на плотной среде - нежный мелкоросинчатый налет или отдельные голубоватые мельчайшие колонии;
- на СЖН при росте чистой культуры розовый цвет среды не изменяется, при смешанном росте или размножении только других видов микробов среда становится ярко-желтой.
- биохимические свойства:
не ферментируют углеводы и мочевину, дезаминируют глутаминовую и аспарагиновую кислоты, оксидазоположительны, индол не выделяют. Образуют сероводород, за исключением подвида С. fetus venerealis. Желатин не разжижают, молоко не свертывают. Реакции с метиловым красным и Фогеса - Проскауэра отрицательны. Подвиды С. fetus синтезируют каталазу и не редуцируют нитраты.
- Биопроба.
Заражают подкожно, внутрибрюшинно, интравагинально или орально двух беременных морских свинок или четырех небеременных белых мышей. У морских свинок происходят аборты. - Устойчивость.
В сене, подстилке, навозе, почве, воде кампилобактеры остаются жизнеспособными при температуре 18-27 °С до 20 дней, при 6 °С - до 1 мес; в гниющем материале разрушаются быстро. В инфицированных тканях матки и плодов при температуре минус 20 °С сохраняются 5-8 мес. Высушивание их убивает через 3 ч, при 55 °С гибнут в течение 10 мин.Растворы едких щелочей, хлорной извести, свежегашеной извести в концентрациях, применяемых для дезинфекции, убивают их за 5-10 мин. - Иммунитет.
Переболевшие кампилобактериозом животные приобретают прочный иммунитет.
РА с влагалищной слизью коров и телок (РАВС). Она основана на обнаружении в слизи агглютининов с помощью кампилобактериозного антигена. Агглютинины появляются в слизи через 1,5 - 4 месяца с начала заражения. У абортировавших на почве кампилобактериоза коров их обнаруживают в первые дни после аборта.
Слизь берут на марлевый тампон. Его готовят из бинта длиной 10 - 12 см, сворачивают до размера сливы, перевязывают ниткой, а затем ее наматывают на тампон и помещают в пробирку, конец нитки фиксируют пробкой. Тампоны стерилизуют в автоклаве.
Перед реакцией тампоны со слизью отжимают и выбрасывают. В необходимых случаях экстракт слизи фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют в течение 20 - 30 минут при 3000 об./мин.
Реакцию ставят в четырех разведениях в объеме 1 мл. Во вторую, третью, четвертую пробирки наливают 3-процентный раствор хлористого натрия с 0,3% формалина. Экстракт слизи разливают в первую и вторую пробирки по 0,5 мл. Содержимое второй пробирки перемешивают и 0,5 мл переносят в третью пробирку, из третьей - в четвертую, а из нее 0,5 мл смеси удаляют.
Во все четыре пробирки вносят по 0,5 мл стандартного кампилобактериального антигена с 1 млрд. концентрацией микробных клеток.
Контроли к реакции:
1. На самоагглютинацию. К 0,5 мл антигена добавляют 0,5 мл формалинизированного 3-процентного раствора поваренной соли.
2. На активность. В каждое разведение типоспецифической сыворотки от 1:50 до 1:400 добавляют 0,5 мл испытуемого антигена.
3. На специфичность. В разведения нормальной сыворотки кролика 1:100 и 1:200 вносят по 0,5 мл того же антигена.
Пробирки опыта и контроля встряхивают и ставят на сутки в термостат, а затем выдерживают при комнатной температуре в течение 3 - 4 часов. Учет реакции начинают с контролей. При правильном ходе реакции контроли 1 и 3 должны быть отрицательными, а второй - положительным. После этого учитывают ход реакций в опыте.
Положительная реакция: ++++ или +++ (4 или 3 креста) - полное просветление жидкости во всех пробирках или только в первой и второй и неполное просветление в третьей и четвертой пробирках. На дне образуется рыхлый осадок, который при встряхивании разбивается в мелкие хлопья.
Сомнительная реакция: ++ или + (2 или 1 крест) - неполное просветление жидкости в первой и второй пробирках, небольшое количество осадка на дне их.
Отрицательная реакция (-) - феномен агглютинации отсутствует во всех четырех пробирках.
Реакция агглютинации с сывороткой крови и молока не применяется для диагностики кампилобактериоза.
Положительная РАВС подтверждает наличие кампилобактериоза в стаде, но по ней нельзя ставить диагноз на это заболевание. Для этого нужно выделить культуру возбудителя болезни.