Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.
Возбудитель - бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (овец и коз), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), канис (собак), овис (баранов и овец) и неотома (кустарниковых крыс).
Микроорганизмы первых четырех видов вызывают бруцеллез животных, а пятого вида - инфекционный эпидидимит баранов (ИЭ).
Для бактериологического исследования на бруцеллез направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее трех плодов) или селезенку, печень, желудок плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки, и околоплодную жидкость.
Для прижизненной диагностики бруцеллеза от животных берут кровь, молоко, содержимое гигром (бурситов) и абсцессов.
3.3. Бактериоскопическое исследование
Из доставленного на исследование патологического материала делают по два мазка из каждого объекта. Мазки, фиксированные над пламенем горелки, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шину (см. Прил. N 1, п. 1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы - мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно коккобактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину в красный цвет.
Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночный глюкозо-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночный глюкозо-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар.
Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37 - 38 °С.
При исследовании материала от крупного рогатого скота половину
засеянных пробирок и чашек культивируют в обычных условиях, другую
- в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10 - 15%)
в СО -инкубаторе или эксикаторе (микроанаэростате).
Первичный осмотр посевов проводят через 24 - 48 ч. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем свете - сероватый. С возрастом колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.
В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное кольцо, возвышающееся над уровнем бульона, а в дальнейшем небольшой осадок на дне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.
Для постановки пластинчатой реакции агглютинации на стекле необходимы следующие компоненты: испытуемая культура, набор для серологической дифференциации бруцелл (выпускается биопредприятием), 0,5%-ный фенолизированный физиологический раствор рН 7,0 - 7,2.
Для исследования берут двухсуточные агаровые культуры. R- и S-сыворотки бруцеллезные агглютинирующие разводят 0,5%-ным фенолизированным физиологическим раствором до рабочего разведения, указанного на этикетке коробки. Разведенные сыворотки допускается использовать в течение месяца. R-антиген бруцеллезный цветной для РА и антиген бруцеллезный для роз бенгал пробы в пластинчатой РА применяют неразведенными. Предметные стекла для реакции подготавливают общепринятым способом. Физиологический раствор, пробирки и пипетки должны быть стерильными.
Техника постановки реакции. На предметное стекло раздельно наносят по одной капле R- и S-сывороток бруцеллезных агглютинирующих и физиологического раствора. Испытуемую культуру бактериологической петлей отдельно эмульгируют в каплях R- и S-сывороток и в капле физиологического раствора для определения самоагглютинации культуры. Параллельно в каждом опыте ставят контроли: R- и S-сыворотки в разведении, указанном на этикетке, с цветным R-бруцеллезным антигеном и с роз бенгал антигеном.
Учет и оценка реакции. Реакцию учитывают невооруженным глазом или с помощью увеличительного стекла в течение 2 минут по следующей схеме:
++++ (4 креста) - полное просветление жидкости с образованием четко выраженного агглютината - положительная реакция;
+++ (3 креста) - неполное просветление жидкости с выраженным агглютинатом - положительная реакция;
++ (2 креста) - неполное просветление жидкости со слабо выраженным агглютинатом - положительная реакция;
+ (1 крест) - жидкость без просветления с едва заметным агглютинатом - сомнительная реакция;
- (минус) - просветление жидкости не наступило, смесь гомогенная - отрицательная реакция.
Биологическое исследование проводят на морских свинках (не менее двух) массой 350 - 400 г, предварительно проверенных на бруцеллез исследованием в РА сыворотки крови в разведении 1:5 с отрицательным результатом.
Для постановки биологической пробы используют тот же материал, что и для бактериологического исследования.
Из органов и содержимого желудка абортированного плода готовят суспензию на стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:10 и вводят морской свинке подкожно с внутренней стороны бедра в объеме 1 мл.
На 15, 25 и 40-е сут. после заражения у морских свинок берут кровь в количестве 1 - 2 мл из ушной вены путем надреза или из сердца - путем пункции. Сыворотку крови исследуют в пробирочной РА в разведениях от 1:10 до 1:80.
При положительной реакции агглютинации в разведении 1:10 и выше морских свинок убивают. В случае необходимости получения культуры возбудителя материал от них исследуют бактериологически.
Профилактика бруцеллеза включает комплекс ветеринарных, хозяйственных и санитарно-медицинских мероприятий. Для специфической профилактики используют живую вакцину, приготовленную из авирулентного штамма 19 ВА Br. abortus. Иммунитет после вакцинации сохраняется 1—2 года. Прививки проводят среди работников животноводческих хозяйств и предприятий, перерабатывающих сырье и продукты животноводства, при работе, связанной с возможностью заражения Br. melitensis.
Для лечения применяют сульфаниламидные препараты, стрептомицин, левомицетин и другие антибиотики, вакцино- и физиотерапию.
