Современные методы гистологических исследований весьма многочисленны и разнообразны. Они позволяют производить структурный и гистохимический анализ гистологических объектов на микроскопическом и субмикроскопическом уровнях.
Основным этапом микроскопического изучения животных тканей является исследование объекта средствами классического микроскопического метода, сущность которого определяется фиксацией материала исследования с последующим приготовлением окрашенных срезов. Объектом исслед-я служат также мазки, отпечатки или тонкие пленки тканей.
Световая микроскопия - основной метод анализа строения ж-х и растит. клеток и тканей. Современные микроскопы дают максимальное увеличение в 2000 - 2500 раз. К световой микроскопии относят также фазово-контрастную микроскопию, флуоресцентную и ультрафиолетовую.
Фазово-контрастная микроскопия используется для исслед-я прозрачных бесцветных объектов, в частности живых клеток и тканей. При прохождении через такую среду фаза световых волн смещается на величину, определяемую толщиной материала и скоростью проходящего через него света. Фазово-контрастный микроскоп преобразует эти невидимые глазом фазовые сдвиги в изменении амплитуды световых волн. При этом получается черно-белое изображение, плотность отдельных участков которого зависит от величины произведения толщины объекта на разность в показателях преломления света в нем и в окр. среде.
Флуоресцентная микроскопия. Флуоресценция - свечение объекта, возбуждаемое лучистой энергией. При данном исслед-ии препарат просматривают в УФ или фиолетовых и синих лучах. Различают собственную и наведенную флуоресценцию, вызванную особыми красителями - флуорохромами. Последние, взаимодействуя с различными компонентами клетки, дают специфическое свечение соответствующих структур. Осн. преимущество этого метода - возможность прижизненных наблюдений и его высокая чувствительность.
При УФ микроскопии изображение регистрируется на фотопластинке или на люминесцентном экране.
Электронная микроскопия - метод субмикроскопического исслед-я, осуществляемый с помощью трансмиссионного (просвечивающего) электронного микроскопа. В таком микроскопе длина электромагнитных волн в 100 000 раз короче волны видимого света. В современных трансмиссионных электронных микроскопах разрешающая способность составляет 0,1 - 0,7 нм. Метод сканирующей электронной микроскопии обеспечивает объемное изучение поверхностей объектов исследования.
Авторадиография. Метод цитологического исслед-я, позволяющий анализировать локализацию в клетках и тканях в-в, меченных радиоактивными изотопами. Включенные в клетки изотопы восстанавливают бромистое серебро фотоэмульсии, покрывающей срез. После проявления фотоэмульсии видны зерна серебра (треки), свидетельствующие о локализации в клетке меченых в-в. Методом авторадиографии выявляют место синтеза определенных в-в, пути их внутриклеточного транспорта, состав белков и др.
Гистохимические методы исследования позволяют определить химическую природу составных элементов клеток и межклет. в-ва тканей ж-х организмов. В основе этих методов лежит использование специфических химич. реакций с образованием нерастворимых продуктов синтеза, локализованных в области изучаемых структур. Гистохимическими методами определяют в структурах тканей аминок-ты, белки, нукл. к-ты (ДНК и РНК), различные виды углеводов, липидов, активность ферментов. Продукты реакции анализируют количественно.
В гистохимических исслед-ях для количественного анализа применяют различные методы морфометрии, цитоспектрофотометрии, цитоспектрофлуорометрии, интерферрометрии с последующей математической обработкой цифрового материала.
Методы прижизненного исследования животных тканей. Культура тканей.
Живые клетки и ткани выращивают вне орг-ма в спец. капсулах - в соответствующей пит. среде и при соотв. температуре. В тканевых культурах можно изучать движение, рост, деление клеток и влияние на них различных химич. и физич. факторов. Данный метод широко используют при изучении вирусов. В культурах тканей изучают строение и жизнедеят. клеток, используя цейтраферную микрокиносъемку, фотографируя клетки культуры с определенными, оптимальными для анализа интервалами времени на кинопленку.
Культивирование тканей можно проводить в орг-ме ж-го, помещая их в камеры с пористой стенкой ("диффузионные камеры").
Прижизненная окраска тканей. Некоторые коллоидные красители (метиленовый синий, нейтральный красный, трипановый синий и др.) в определенных дозах нетоксичны и при введении их в кровь ж-му окрашивают соответствующие структуры тканей. (ой это мы так на пат.физиологии делали))))
