Основные принципы:
1) правильно подобрать питательные среды;
2) правильно провести посев бактерий;
3) соблюдать оптимальные условия культивирования (температура, влажность, аэрация, свет).
4) учитывать сроки культивирования.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. Питательные среды – это среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов (бактерий, микроскопических грибков и простейших) в лабораторных и промышленных условиях.
Требования, предъявляемые к питательным средам: 1. Стерильность. 2. Питательность. 3. Влажность. 4. Прозрачность. 5. Кислотность (оптимальный pH). 6. Изотоничность.
Классификация питательных сред по назначению:
• обычные (универсальные) – среды для культивирования большинства микробов (МПА, МПБ).
• элективные (избирательные) – среды для избирательного выращивания одного микроба, сопутствующая микрофлора не растет или растет с задержкой (Китта-Тароцци).
• селективные – это среды, на которых ведется селекция микроба против какого-либо признака (среда с пенициллином).
• дифференциально-диагностические – среды для дифференциации одного микроба от другого по их культуральным и биохимическим свойствам (среды Гисса).
ПОСЕВ БАКТЕРИЙ. Посев бактерий проводят с помощью: бактериологических петель, бактериологических игл, шпателей, пипеток Пастера, стерильных градуированных пипеток. Также возможен посев тампоном.
Существуют техники посева бактерий в: • пробирку с жидкой средой; • пробирку со скошенной плотной седой; • уколом в плотную среду; • чашку Петри с плотной средой.
ТЕМПЕРАТУРА. Оптимальную температуру для культивирования большинства патогенных микроорганизмов (37° С) создают в термостате.
Термостат – это прибор с двойными стенками, между которыми находится воздух или вода, подогреваемые электричеством. Он снабжен терморегулятором (автоматически поддерживающим нужную температуру) и термометром (для контроля за температурой).
ВЛАЖНОСТЬ. Жизнь микробов невозможна без влаги (питательные вещества проникают в клетку только в растворенном виде). Это необходимо учитывать при культивировании на плотных средах: разливать их в чашки и скашивать в пробирках лучше в день посева.
При культивировании микробов, особенно чувствительных к отсутствию влаги, в термостат ставят открытый сосуд с водой.
АЭРАЦИЯ. Аэрация – это снабжение воздухом.
По потребности микробов в свободном кислороде их делят на аэробы (нужен кислород воздуха) и анаэробы (не нужен кислород воздуха).
Виды аэрации:
• Пассивная аэрация – это культивирование культуры можно на поверхности или в тонком слое среды, куда проникает кислород воздуха.
• Активную аэрацию применяют при глубинном культивировании микробов, когда их выращивают в больших объемах среды. Чтобы достаточно снабдить кислородом такие культуры, их помещают в специальные качалки – (постоянное перемешивание культуры обеспечивает соприкосновение ее с воздухом). Или воздух продувают через культуру при помощи специальных устройств.
СВЕТ. Свет подавляющему большинству микробов (к ним относятся все патогенные) не нужен – их культивируют в темноте. Следует избегать попадания прямых солнечных лучей, действующих на культуры губительно.
Однако для изучения пигментообразования, которое происходит активнее на рассеянном свету, культуры после термостата выдерживают 2-3 дня при комнатном освещении.
СРОКИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ. Каждый микроб имеет свои сроки культиворования, в течение которых он образует характерные изменения на питательных средах. Большинство патогенных микробов культивируют 18-24 ч, но есть виды, растущие медленно (до 4-6 недель и более).
