Аффинная хроматография – метод разделения и очистки высокомолекулярных биологических соединений, основанный на уникальном свойстве макромолекул – их биологической специфичности. Именно благодаря этой особенности данным методом можно теоретически получить абсолютно чистые вещества в отличие от других хроматографических методов разделения, основанных на физико-химических свойствах макромолекул, которые у отдельных молекул могут быть практически одинаковы.
Механизм разделения в аффинной хроматографии можно представить следующим образом. С нерастворимым носителем (матрицей) ковалентно связано соединение (лиганд), взаимодействие с которым разделяемых веществ основано на биологической функции последних. В качестве матрицы используют гели агарозы или полиакриламида. Выделяемое вещество связывается лигандом, образуя комплекс, и вследствие этого выделяется из раствора. На стадии элюирования комплекс разрушается, и вещество вновь переходит в раствор. Таким образом, взаимодействие вещество-лиганд должно быть специфическим и обратимым.
Аффинную хроматографию проводят в водных буферных растворах, подбирая оптимальные условия для каждого конкретного случая.
Применяется для очистки клеток, белков, антигенов и антител, витаминов, гормонов, и др. Благодаря высокой специфичности, метод позволяет концентрировать вещества из больших объемов растворов.
