1)Иммуноферментный анализ.
В методах иммуноферментного анализа (ИФА) используют иммунореагенты, меченные ферментами (рис. 5.5). Наиболее широко применяется твердофазный ИФА. В качестве твердой фазы чаще всего используют полистироловые или поливиниловые планшеты или шарики, на которых адсорбированы антигены или антитела.
Для выявления антител известный антиген адсорбируют в лунках полистироловой пластины. Затем вносят исследуемую сыворотку, в которой хотят обнаружить антитела к данному антигену. После инкубации лунки промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченные ферментом (обычно пероксидазой). После инкубации и отмывания в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат (перекись водорода) и хромоген (орто-фенилендиамин) для регистрации конечных продуктов расщепления субстрата. О наличии и количестве антител судят по изменению цвета и интенсивности окраски раствора. Для регистрация окраски используют специальные спектрофотометры с вертикальным ходом луча (ридеры-мультисканы).
Методы ИФА обладают высокой чувствительностью и специфичностью и получили широкое распространение в различных областях биологии и медицины.
2)
1. Лабораторная диагностика Эпидемического возвратного тифа и эндемичных клещевых тифов:- бактериоскопия (мазок крови во время приступа)- биопробы на морских свинках (остаются здоровы, при эндемическом возвратном тифе – больны) - экспресс-диагностика (РИФ, ПЦР, ИФА для определения антигенов и генов возбудителя в патологическом материале - Серодиагностика (реакция иммобилизация боррелий РИБ, ИФА, РИФ) 2. Лабораторная диагностика Болезни Лайма:- Бактериологический (выделение культуры из ткани эритемы, крови, ликвора (трудно)- Экспресс-диагностика - Ag в ткани эритемы (РИФ)- Выявление Ig (иммуноблоттинг)IgM (на 3-6 неделе после инфицирования)IgG (через несколько месяцев после инфицирования)- Основной метод – клинический! |
? Эпидемический возвратный тиф – антропонозное трансмиссивное заболевание, характеризующееся общей интоксикацией, волнообразной лихорадкой, поражением печени и селезёнки, иногда желтухой, менингитом, поражением других внутренних органов.Патогенез: боррелии захватываются лейкоцитами ? выход в кровь ? лизис возбудителя иммуноглобулинами и выход эндотоксина ? приступ лихорадки (активация макрофагов и синтез пирогенна ИЛ-1) ? освобождение от преобладающего серовара ? сохранение других сероваров в органах или лимфоузлах? повторный выход в кровяное русло нового серовара ? новый приступ (может быть несколько приступов в течение болезни). ? Во время приступа наблюдается повышение температуры, головная и мышечная боль, повреждаются паренхиматозные органы, ССС (геморрагии на коже и в органах), ЦНС. Приступ длится 5-7 дней. Затем наступает этап апирексии (5-9 дней) ? Клещевые спирохетозы – острое трансмиссивное природно-очаговое заболевание, протекающее в виде лихорадочных приступов (может быть 5-6 приступов) с периодами нормальной температуры. Протекает более легко, приступы более короткие.Эндемичные очаги расположены на всех континентах, кроме Австралии. Для каждого природного очага – свой вариант возбудителя.? Болезнь Лайма – системная природно-очаговая трансмиссивная инфекция, характеризующаяся кольцевой мигрирующей эритемой, лихорадкой, поражением ЦНС, ПНС, ССС, опорно-двигательного аппарата (суставов).Фазы заболевания: 1. Локальное поражение (кольцевая мигрирующая эритема)2. Невралгические и кардиальные расстройства (несколько недель или месяцев)3. Артритические поражения (через несколько лет) |
Эпидемический тифИИ - антропоноз МП – трансмиссивный (переносчики – платяные вши). При укусе наблюдается зуд, человек при почёсывании раздавливает вошь и втирает содержимое гемолимфы в кожу Иммунитет - нестойкий Эндемический тиф ИИ – грызуны МП - трансмиссивный (переносчики – клещи из рода Ornithodorus, у которых происходит трансовариальная передача возбудителя, что обеспечивает эндемичность инфекции). На месте укуса – розовое пятно, затем образуется узелок с геморрагическим ободком, из которого боррелии поступают в кровь. Иммунитет – стойкий. Болезнь Лайма: эпидемиология Источники инфекции – мелкие грызуны, олени, лосиПереносчики – Ixodes (ареал обитания = район распространения болезни Лайма)Механизм передачи - трансмиссивный |
|
Специфической профилактики нет. При эндемичном тифе у населения развивается естественный иммунитет в результате бытовой иммунизации. Болеют в основном приезжие. Неспецифическая профилактика – уничтожение вшей (борьба с педикулёзом), дератизация, меры по предотвращения укусов. |
3)Калицивирусы
Впервые были выделены от животных в 1932 г., а в 1976 г. были
обнаружены в фекалиях детей, страдающих острым гастроэнтеритом.
Сейчас они выделены в самостоятельное семейство — Caliciviridae.
Вирионы имеют сферическую форму и диаметр от 20 до 40 нм,
суперкапсида нет. На поверхности вириона имеются 32 чашеобразных
вдавления, расположенных в соответствии с икосаэдральной симметрией.
Капсид состоит из 180 белковых молекул. Геном представлен позитивной
однонитевой РНК.
Калицивирусы устойчивы к эфиру, детергентам, чувствительны к
низким значениям рН, инактивируются при прогревании при 56?С.
Механизм передачи вирусов — фекально-оральный.
Патогенез заболеваний обусловлен некротическими поражениями
эпителия слизистой оболочки тонкой кишки, сопровождающимися
развитием диарейного синдрома. Инкубационный период не превышает
1?2 дня. Выделяют три типа поражений: заболевания с выраженной рвотой
(чаще у детей в зимние месяцы), эпидемические диареи (у подростков и
взрослых), гастроэнтериты (чаще у детей). Через 7?10 дней наступает
спонтанное излечение.
Калицивирусы не размножаются в культурах клеток. Для
обнаружения вируса в основном используют метод иммунной электронной
микроскопии (ИЭМ). Материалом для исследования служат фекалии и
рвотные массы. Серологические методы включают обнаружение антител
класса М с помощью ИФА.
Вирусы Норволк в настоящее время отнесены к семейству Caliciviridae.
В развивающихся странах антитела к вирусам Норволк и другим типам
подобных вирусов (Гавайи, Монтгомери, Каунти, Таунтон, Саппоро)
выявляют у 40?50% взрослого населения и иногда у детей. Лабораторное
выделение возбудителей обычно не проводят, хотя их можно выделить из
испражнений в культурах клеток почек эмбриона человека.
