1)Плазмиды — кольцевидные молекулы ДНК, способные к
саморепликации. Их возможные состояния:
• автономное (в цитоплазме);
• интегрированное (в нуклеоиде).
Конъюгативные плазмиды способны к самопереносу из одной клетки в
другую. Неконъюгативные плазмиды способны к переносу с помощью
конътативных плазмид и бактериофагов.
Функции плазмид:
• регуляторная – компенсирует нарушение функции ДНК нуклеоида;
• кодирующая – вносит в генотип новую информацию.
Плазмиды подразделяются на различные категории в зависимости от
свойств, которые они кодируют у бактерий.
F-плазмида, или половой фактор. Контролирует синтез половых ворсинок
(sex или F-pili), которые способствуют эффективному спариванию
бактерий-доноров с реципиентными клетками при конъюгации. F-
плазмида реплицируется в независимом от хромосомы состоянии и
передается при конъюгации в клетки бактерий-реципиентов.
Перенос генетического материала (ДНК) детерминируется tra-опероном F-
плазмиды (от англ. transfer — перенос), обеспечивающим конъюгативность.
F-плазмиды содержат только tra-оперон, в их составе нет никаких других
генов.
F-плазмида может встраиваться в бактериальную хромосому и находиться
с ней в интегрированном состоянии.
Функции tra-оперона:
• детерминирует образование конъюгативных пилей;
• моблизирует на перенос:
– саму конъюгативную плазмиду (F+);
– другую, неконъюгативную, плазмиду;
– участок нуклеоида.
R-плазмиды (плазмиды множественной лекарственной устойчивости).
Известно большое количество R-плазмид, определяющих устойчивость
бактерий к лекарственным препаратам. Передача R-плазмид привела к их
широкому распространению среди бактерий и значительно осложнило
химиотерапию инфекционных заболеваний.
Состав R-плазмид:
• r-оперон(-ы) + tra-оперон;
• r-оперон(-ы).
Пути передачи R-плазмид:
• при трансдукции (грамположительные бактерии);
• при конъюгации (грамотрицательные бактерии).
Состав r-оперона:
• гены, детерминирующие синтез ферментов:
– инактивирующие антибиотик;
– модифицирующий антибиотик;
– снижающие проницаемость клеточной стенки бактериальной
клетки к антибиотику;
• может содержать:
– транспозон;
– IS-последовательность.
Бактериоциногенные плазмиды (на примере Col-плазмиды E.coli) ?
плазмиды, детерминирующие синтез колицинов (антибиотикоподобных
веществ).
Состав Col-плазмид:
• гены, детерминирующие синтез колицина;
• tra-оперон.
Особенности Col-плазмид:
• редко интегрируют в нуклеоид;
• обычно репрессированы;
• при их дерепрессии бактериальная клетка синтезирует колицины и
погибает (потенциально летальная плазмида).
Свойства бактериоцинов:
• представляют собой вещества белковой природы и функционируют
как антибиотики с узким спектром действия;
• вызывают гибель клетки, не нарушая ее целостности;
• ингибируют синтез ДНК, РНК и белка;
• обладают свойствами эндодезоксирибонуклеаз;
• обладают летальным признаком – после выделения бактериоцина
бактериальная клетка может погибнуть;
• клетка, выделяющая бактериоцины, устойчива к действию
гомологичных бактериоцинов извне.
2)Методы диагностики аллергических реакций
Цели аллергодиагностики:
• выявление свободных антител в сыворотке крови и секретах;
• обнаружение антител, связанных с лейкоцитами. Применяемые
реакции:
– прямой тест дегрануляции базофилов,
– реакция аллергенспецифического повреждения гранулоцитов,
– реакция выброса ионов К+ и др;
• определение лимфоцитов, сенсибилизированных к аллергену.
Методы диагностики аллергических реакций:
• специальный расспрос больного (аллергологический анамнез).
Выясняется наследственная предрасположенность к аллергическим
заболеваниям, предположительно определяются аллергены;
• кожные пробы. Варианты постановки:
– накожные (аппликационные, patch-tests) пробы;
– скарификационные кожные пробы;
– внутрикожные пробы.
Результаты кожных проб в зависимости от применяемого антигена
оценивают через 20 минут, 5-6 часов и 1-2 суток. Интенсивность реакции
определяют обычно в плюсах (от 1 до 4) или по диаметру папулы на коже.
• провокационные тесты;
• элиминационные тесты;
• лабораторные методы. Наиболее часто при аллергических
заболеваниях применяют методы количественного определения
иммуноглобулинов различных классов, особенно IgE; реакция
Кумбса применяется для распознавания гемолитической анемии.
3)
КЛОСТРИДИИ – ВОЗБУДИТЕЛИ АНАЭРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ (ГАЗОВОЙ ГАНГРЕНЫ) |
Васillасеае Род: Clostridium Виды: Cl.perfringens, Cl.septicum, Cl.histolyticum, Cl.novyi (oedematiens) Широко распространены в окружающей среде, являются представителями нормальной микрофлоры ЖКТ человека и животных |
Крупные Гр+ палочки, с овальной субтерминально или центрально расположенной спорой, диаметр споры превышает диаметр клетки, поэтому палочка со спорой имеет сходство с веретеном, отсюда и название рода (clostrum - веретено). Естественной средой их обитания служит кишечник травоядных животных и человека, а также почва, куда они поступают с испражнениями и могут там длительно сохраняться и размножаться при благоприятных условиях. Принимают участие в круговороте веществ в природе. Cl.perfringens является санитарно-показательным м/о. Возбудители газовой гангрены подвижные (кроме Cl.perfringens), не имеют капсулы (кроме Cl.perfringens), спорообразования в животном организме не происходит. Относительно друг друга: Cl.perfringens — короткая и толстая палочка, Cl.novyi - длинная и толстая палочка, Cl.septicum - длинная и тонкая палочка, может быть нитевидной формы, Cl.histolyticum - самая мелкая из них палочка. |
6 сероваров A-F различаются по структуре экзотоксинов. Серовар А – основной. Наиболее патогенными для человека являются А, С, D. Серовары А, С, D, помимо анаэробной инфекции, также способны вызывать ПТИ или интоксикации (гастроэнтериты). Клостридиальный энтероколит (серовары А и F) – ВБИ недоношенных новорождённых. |
Патогенность возбудителей связана с действием экзотоксинов на мембраны различных тканей. Экзотоксины ? a-токсин (лецитиназа С) (основной продуцент тип А) Оказывает дермонекротическое, гемолитическое, летальное действие. ? b-токсин (основной продуцент тип С) – вызывает некроз тканей. ? Q-токсин (основной продуцент также тип С) Оказывает дермонекротическое, гемолитическое, летальное действие. ? k-токсин (коллагеназа и желатиназа) (основные продуценты - типы С и А) – разрушает коллагеновые волокна соединительной ткани и мышцы, обладает некротическим и летальным действием. ? m-токсин (гиалуронидаза) – повышает проницаемость тканей ? n-токсин (ДНК-аза) – расщепляет НК и нарушает синтез белка ? Энтеротоксин (основные продуценты - типы С и А при споруляции в толстой кишке, вызывает ПТИ) – вызывает некротический энтерит с кишечным расстройством, рвота, диарея. |
Строгие анаэробы. Мезофилы. • C.perfringens и C.histolyticum – аэротолерантные анаэробы • C.novyi и C.septicum - строгие анаэробы Cl.perfringens: МПБ - диффузное помутнение и интенсивное газообразование, быстрое створаживание молока с образованием рыхлого сгустка; На кровяном агаре - круглые колонии с зоной гемолиза, на Вильсона-Блера агаре - чёрного цвета колонии и разрыв среды за счёт газообразования. Cl. novyi МПБ - лёгкое помутнение, умеренное газообразование; молоко свёртывает медленно; КА — серые шероховатые колонии с зоной гемолиза. Cl.septicum МПБ - помутнение, умеренное газообразование; молоко свёртывает медленно; КА - колонии с тонкими отростками с зоной гемолиза; Cl.histolyticum МПБ - диф. помутнение, без газа; КА - колонии мелкие, гладкие, прозрачные с узкой зоной гемолиза |
Превалируют сахаролитические св-ва - Cl.perfringens, Cl.novyi, Cl.septicum. Протеолитические св-ва у Cl.histolyticum. Наибольшей биохимической активностью и выраженным газообразованием обладает C.perfringens (разлагает до кислоты и газа многие углеводы, кроме маннита). • Ферментативная активность различна и используется для дифференциации видов |
Материал для исследования: раневое отделяемое (экссудат), некротизированная ткань, кровь. Ведущий возбудитель - CL.perfringens. 1. Микроскопический метод: Материал плотный измельчают, центрифугируют и из осадка готовят препараты с окраской по Граму и по Бурри-Гинсу ?Гр+ палочки при отсутствии лейкоцитов 2. Бактериологический метод: 1-й этап: обработанный материал засевают на питательные среды (Китта-Тароцци, обезжиренное молоко (среда Тукаева), Вильсона-Блера, агар Цейсслера). Жидкие среды регенерируют (кипятят) и заливают вазелиновым маслом. Чашки выращивают в анаэростате. 2-й этап - изучение роста на средах: наиболее характерны изменения сред при росте Cl.perfringens. Помутнение и образование пузырьков газа на среде Китта-Тароцци наступает через 6 часов, молоко свертывается через 2-3 часа. К этому же времени наступает почернение с разрывами среды Вильсона-Блера (через 3 часа). Другие возбудители указанные среды изменяют позже и менее типично. На среде Цейсслера Cl.perfringens образуют серые крупные дисковидные колонии с зоной гемолиза. На среде Вильсона-Блера - колонии черного цвета. Из отдельных колоний делают мазки по Граму и их отсевают на среду Китта-Тароцци (для накопления чистой культуры). 3-й этап - изучение выделенной культуры: - мазок по Граму; - определение ферментативных свойств; ? Реакция нейтрализации (РН) на белых мышах для определения типа токсина; В РН используют диагностические противогангренозные сыворотки (поливалентные и моновалентные). Вид клостридий устанавливают по антитоксину, который обеспечил выживаемость мышей при обязательной гибели всех остальных опытных животных, получивших иную сыворотку, и контрольных мышей, которым вводили материал без сыворотки (см. протокол) 3. Биологический метод: заражают подкожно белых мышей суспензией материала. Животные погибают при картине экспериментальной газовой гангрены (местный отек с газообразованием, расплавление подкожно-жировой клетчатки). 4. Экспресс-диагностика (РИФ). Газожидкостная хроматография позволяет быстро выявить анаэробы по спектру выделяемых жирных кислот. Также ставят РНГА с поливалентным эритроцитарным антитоксическим диагностикумом для выявления экзотоксина в крови обследуемых. |
Газовая гангрена — полимикробная анаэробная раневая инфекция, характеризующаяся выраженной интоксикацией, быстрым омертвлением тканей (некрозом) с газообразованием (при отсутствии воспалительных явлений) и развитием отёка в них. В развитии интоксикации принимают также участие всасываемые продукты распада соединительной и мышечной тканей. Течение болезни усугубляет сопутствующая, в том числе гноеродная, микрофлора (стафилококки, протеи, кишечная палочка, бактероиды и др.). Газовая гангрена даёт различные клинические проявления в зависимости от места локализации. - Анаэробная инфекция мягких тканей конечностей и туловища; - Анаэробная инфекция мозга, брюшной полости, грудной клетки; - Анаэробный остеомиелит; - Послеродовая или послеабортная анаэробная инфекция. Патогенез: газообразование – результат ферментативной активности клостридий, а некроз – результат действия токсинов и ферментов, интоксикация – результат отравления токсинами и продуктами тканевого разложения. ИП – несколько часов до 5 дней. Клинические формы газовой гангрены: 1. Эмфизематозная (обильное газообразование в ране). 2. Смешанная форма (отёк, газообразование). 3. Токсическая (быстрое развитие отёка с резким побледнением кожи). 4. Флегмонозная (отёк + вторичная инфекция). |
ИИ – почва и загрязнённый спорами материал (сапроноз) МП – контактный чрескожный (загрязнение ран почвой или различными споросодержащими материалами). Анаэробная инфекция (в том числе и газовая гангрена) возникает при наличии следующих условий: Наличие глубокой рваной раны с карманами, затёками. Инфицирование раны почвой и другими материалами, содержащими клостридий (шовный материал, кусочки одежды) Наличие в ране микробных ассоциаций с гноеродными кокками или гнилостными микроорганизмами – нетоксигенные сапрофитные клостридии (смешанные инфекции). Факультативные анаэробы используют тканевой кислород, создавая анаэробиоз в тканях. Снижение иммунного статуса организма. Сдавление тканей, большая степень ожога, отморожения. Самое главное условие – нарушение кровоснабжения тканей (в результате понижается ОВП). |
Анатоксины – перфрингенс и эдематиенс Лечебно-профилактические антитоксические сыворотки • антиперфрингенс • антиэдематиенс • антисептикум Секстанатоксин – содержит 6 анатоксинов (перфрингенс, нови, тетани, ботулинум А, В, Е). Противогангренозный анатоксин |