1)Методы микробиологических исследований. Бактериоскопический метод диагностики инфекционных заболеваний.
Методы лабораторной диагностики инфекционных агентов многочисленны, к основным можно отнести следующие.
1. Микроскопический - с использованием приборов для микроскопии. Определяют форму, размеры, взаиморасположение микроорганизмов, их структуру, способность окрашиваться определенными красителями.
2. Микробиологический или культуральный (бактериологический и вирусологический) - выделение чистой культуры и ее идентификация.
3. Биологический - заражение лабораторных животных с воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях (биопроба).
4. Иммунологический (варианты - серологический, аллергологический) - используется для выявления антигенов возбудителя или антител к ним.
5. Молекулярно-генетический - ДНК- и РНК- зонды, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и многие другие.
Характеристика бактериоскопического метода исследования.
Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования - совокупность способов изучения морфологических и тинкториальных (способность окрашиваться) свойств микробов в исследуемом материале (лабораторная культура, патологический материал, пробы из внешней среды) с помощью микроскопии. Основная цель - установление этиологии болезни, морфологическая идентификация, а также определив чистоты выделенной чистой культуры. В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов: а) бактериологический мазок (препарат-мазок); б) "висячая капля"; в) "придавленная капля"; г) тонкий мазок; д) "толстая капля"; ж) препарат-отпечаток.
Этапы метода:
1. Забор материала (гной, мокрота, кровь, моча, испражнения, промывные воды бронхов и желудка, ликвор, содержимое полостей носа, вагины, трупный материал и др.).
2. Транспортировка материала.
3. Приготовление микропрепаратов, фиксация и окраска (при необходимости).
4. Микроскопия с оценкой формы, размеров, взаимного расположения микробов и т.д.
5. Заключение.
Приготовление фиксированного мазка:
1. Собственно приготовление мазка.
2. Высушивание.
3. Фиксирование.
Микроскопия.
Оценка метода: Метод прост, широко доступен, быстр, экономичен, но мало чувствителен и мало специфичен (из-за схожести морфологии
микроорганизмов разных видов), небезопасен (работа с живыми микробами).
2)Реакции повышенной чувствительности немедленного типа
I тип реакций. Анафилактические реакции (реагиновые, IgE- зависимые).
У здорового человека в сыворотке крови содержится от 0 до 100 кЕ/л IgE. При аллергических реакциях и гельминтозах количество общего IgE в сыворотке крови обычно увеличивается. Однако более 90% синтезированного в организме IgE секретируется через эпителий слизистых оболочек и удаляется со слизью. Возможно он участвует в защите слизистых оболочек от инфекций. При глистных инвазиях его количество резко увеличивается (до 1000 кЕ/л).
Антитела этого класса против различных аллергенов участвуют в аллергических реакциях. Их выявление имеет диагностическое значение.Для активации рецептора и передачи сигнала внутрь клетки
необходимо, чтобы минимум две молекулы IgE, ранее связавшиеся
базофилами (тучными клетками), фиксировали своими Fab-
фрагментами два эпитопа (детерминанты) аллергена. Это обычно
происходит при повторном его попадании в организм
(иммунологическая, специфическая стадия реакции). Такое
взаимодействие аллергена и IgE-антител индуцирует
трансмембранный сигнал, который уже в течение минуты активирует
базофил.
Когда наступает патохимическая, медиаторная стадия, гранулы
базофила передвигаются по направлению к периферии клетки и
покидают ее через поры мембраны. Процесс дегрануляции не
сопровождается разрушением мембраны и базофил сохраняет свою
жизнеспособность. Из гранул базофила освобождаются гистамин,
лейкотриены, триптаза, тромбоцитактивирующий фактор, серотонин,
факторы хемотаксиса эозинофилов и нейтрофилов, группа
интерлейкинов (ИЛ-4, 5, 6, 8), вовлекающих другие лейкоциты. Этиклетки, в свою очередь, выделяют вторичные медиаторы (поздняя фаза реакции). Выделившиеся медиаторы приводят к сокращению гладкой мускулатуры, усилению секреции бронхиальной слизи, увеличению сосудистой проницаемости (патофизиологическая стадия). Реакция заканчивается стадией клинических проявлений.
Поздняя фаза этой аллергической реакции (через 4 – 12 часов) характеризуется вовлечением в процессе эозинофилов, нейтрофилов, макрофагов. Причем важным этапом является их прилипание к эндотелию и экзоваскулярная миграция. Этому предшествует усиление экспрессии молекул адгезии на лейкоцитах и эндотелии (молекул ICAM-1 и ICAM-2, CD11/CD18, E-селектина и др.).
Хотя IgE- механизм развития атопических реакций считается основным, возможно участие в нем антител класса IgG, особенно IgG4 субкласса.
Клиническая картина реакции I типа может выражаться в виде анафилактического шока, приступа бронхиальной астмы, ринита, конъюнктивита, крапивницы и др.
Наиболее быстрая реакция – анафилактический шок, который на укусы насекомых или инъекции лекарств-аллергенов развивается в течение нескольких секунд. Ведущим клиническим синдромом является падение артериального давления (коллапс).
Продукция IgE регулируется разными цитокинами: ИЛ-4, ИЛ-25 и ИЛ-10, выделяемые Тх 2-го типа, стимулируют, а гамма-интерферон и ИЛ-2, секретируемые Тх 1-го типа, угнетают его синтез.
На этапе сенсибилизации под влиянием аллергена образуются IgE-антитела, которые связываются высокоаффинными Fc-RI рецепторами мембран базофилов (рис. 4.2).
3)
|
ФРАНЦИСЕЛЛЫ |
|
Brucellaceae род Francisella вид Francisella tularensis |
|
Мелкие, полиморфные, грамотрицательные, биполярно окрашиваемые коккобактерии, неподвижны, не имеют спор. В препаратах из патологического материала, внутренних органов располагается интрацеллюлярно (диагностически важный признак). |
|
Имеют 2 Аг: 1) О – соматический (ЛПС) – есть общие субстанции с бруцеллезными Аг, что может приводить к перекрестным реакциям. 2) Vi-Аг – капсульный АГ, выделяется только у вирулентных форм франциселл в S-форме колонии. У R-формы колонии присутствует только О-Аг. |
|
1. Капсула. 2. Незавершённый фагоцитоз, подавление системы комплемента и макрофагов. 3. Аллергические свойства клеточной стенки (ГЗТ). 4. Эндотоксин. 5. Нейраминидаза. |
|
Хемогетероорганотрофы, мезофилы, строгие аэробы. Очень прихотливы к питательным средам. Нуждаются в аминокислотах, пантотеновой кислоте, ионах магния. Среды: кровяной агар с глюкозой и цистином, яичные среды. Рост медленный и скудный от 3 дней до 3 недель (мелкие прозрачные колонии). Специальные питательные среды: 1) Среда Мак-Кой – свернутая яично-желточная среда. Рост в виде нежных мелких колоний (S-форма) 2) Среда Френсина – МПА с кровью, глюкозой и цистином. Колонии круглые, гладкие, молочного цвета, окружены зеленоватым ореолом. 3) Среда Емельяновой – содержит аутолизат дрожжей, цистин, рыбную муку, желатин. |
|
Ферментируют углеводы до кислоты. Каталаза «+», оксидаза «-». Выделяют сероводород. |
|
1. Серологический: Со 2-ой недели заболевания является основным в обычных клинических условиях, т.к. бактериологический и биологический методы можно проводить только в специальных лабораториях ООИ. Ставят реакции: РНГА; РА; кровяно-капельную реакцию (ориентировочная). Кровяно-капельная реакция – при массовых обследованиях вместо развернутой РА проводят на стекле предметном – куда наносят каплю крови и гемолизируют ее в дист. Н2О + туляремийный диагностикум ? «+» результат «хлопья» наступает немедленно. 2. Аллергический метод чаще используется для оценки естественного и вакцинального иммунитета. Проба с аллергеном тулярином (взвесь убитых нагреванием туляремийных микробов). Реакция положительная с 3-4 дня (у переболевших или вакцинированных). 3. Экспресс-диагностика. 4. Бактериологический метод используется редко, так как скудный и медленный рост. 5. Биобактериологический метод (заражение морских свинок ? посев трупного материала на среды ? рост через 2-3 недели ? идентификация по антигенным, биохимическим, культуральным свойствам). |
|
Туляремия – природно-очаговое зоонозное заболевание, протекающее с лихорадкой, интоксикацией, лимфаденитом и поражением внутренних органов, разнообразной клинической картиной и медленным восстановлением трудоспособности. Патогенез: проникновение в лимфоузлы, затем размножение в макрофагах, после чего возбудитель проникает в кровь. В очагах скопления возбудителя формируются туляремийные гранулемы, т.е. первичные бубоны. При дальнейшем распространении возбудителя могут образовываться вторичные бубоны. В пораженных органах (печень, костный мозг, легкие) образуются гранулемы и некротические очаги. Эндотоксин детерминирует некротические изменения в органах, ГЗТ. Клинические формы: 1. Бубонная форма (ангинозно-бубонная, глазобубонная, язвенно-бубонная/железистая). 2. Легочная форма 3. Генерализованная форма (тифоидная туляремия, чаще заражение происходит алиментарно). 4. Желудочно-кишечная (абортивная) форма – язвенные очаги в ЖКТ и специфическое воспаление брыжеечных лимфоузлов, может быть кишечное кровотечение. |
|
Среди диких животных в естественных условиях наблюдаются эпизоотии. Зооноз (источник инфекции – грызуны, хомяки, ондатры др. животные). ? Для человека min ID = 1 микробная клетка. Входные ворота – кожа, слизистые. Пути передачи: 1. Контактный (прямой и непрямой). 2. Алиментарный. 3. Трансмиссивный (клещи, комары). Иксодовые клещи передают возбудителя через испражнения, которые человек втирает при расчесывании в месте укуса. 4. Воздушно-пылевой. В Республике Беларусь – природные очаги в пойме рек и болот Полесья. Туляремийный микроб по вирулентности для кроликов и биохимическим особенностям, а также географическому распространению разделен на подвиды (эколого-географические расы): - голарктическую (не ферментирует глицерин, маловирулентен для кроликов и человека, распространен в Евразии и Америке); туляремийный микроб этого подвида более приспособлен к водным экосистемам, способен распространяться водным путем, передаваться через комаров; - неарктическую (ферментирует глицерин, более вирулентен для кроликов и человека, распространен в Северной Америке); - среднеазиатскую (ферментирует глицерин, мало вирулентен). Среднеазиатский подвид по свойствам занимает промежуточное положение между первыми двумя, приближаясь к исходной предковой форме возбудителя. Н.Г.Олсуфьев выделяет две экологические формы возбудителя - “сухопутную”, характеризующуюся передачей через иксодовых клещей, и “водную”, связанную с околоводными видами грызунов (водяная крыса и ондатра) и другими организмами - гидробионтами, с преимущественной передачей через воду и укусы комаров (голарктический подвид). |
|
Иммунитет стойкий, проверяется с помощью пробы с тулярином. С помощью этой пробы отбирают контингенты на вакцинацию и ревакцинацию. Неспецифическая профилактика (дератизация, санитарный контроль). Специфическая профилактика в эндемических районах лицам из группы риска. Вакцина: Эльберта-Гайского – живая, сухая, ослабленная вакцина. Вводят однократно, накожно. Иммунитет на 5 – 7 лет. |
