Это группа ферментов, катализирующих гидролитическое расщепление субстрата с введение элементов воды на уровне его специфической связи. Примером действия гидролитических ферментов является расщепление пептидных связей между различными аминокислотными остатками в белках рядом пептидаз. Часто р-и этого типа носят необратимый характер. К классу гидролаз относят эстеразы, фосфоэстеразы, карбоксиэстеразы, гликозидазы, пептидазы, амидазы, полифосфатазы, многие ферменты пищеварительных соков (амилаза, пепсин, трипсин). Также гидролазы есть в лизосомах, субклеточных структурах.