Биологические методы. Наиболее достоверной биологической реакцией на беременность является реакция Ашгейм-Цондека. Эта реакция основана на том, что в моче беременной женщины содержится большое количество хориального гонадотропного гормона, который резко стимулирует развитие фолликула и ускоряет наступление овуляции. Если впрыснуть неполовозрелой белой мыши мочу беременной, то через 100 часов в яичниках такой мыши можно обнаружить созревание и разрывы фолликулов, кровоизлияния в них (так называемые кровяные точки) и лютеинизацию (окрашивание желтым пигментом, образование желтого тела). Для проведения этой реакции требуется около 4—5 суток
Реакция производится на лягушках самцах, лучше всего озерных. 2—3 мл свежей нефильтрованной мочи впрыскивают в лимфатический мешок, находящийся на спинке самца лягушки. Через 2 часа глазной пипеткой набирают содержимое из клоаки лягушки и рассматривают под микроскопом. Если моча принадлежит беременной женщине, т. е. в ней имеется большое количество гонадотропного гормона, то в капле, взятой из клоаки лягушки, обнаруживается значительное количество сперматозоидов. Эта реакция дает около 96% правильных результатов.
Иммунологические методы основаны на реакции преципитации с кроличьей антисывороткой, либо на фиксации комплемента, либо на подавлении реакции гемагглютинации. Наиболее широкое применение получил метод подавления реакции гемагглютинации. Метод основан на торможении реакции агглютинации между "заряженными" ХГ эритроцитами (антиген), антисывороткой к ХГ (содержащей специфические антитела) и прибавленной мочой. Когда к антисыворотке (антитела) добавляют эритроциты, "заряженные" ХГ (антиген) и мочу беременной, то присутствующий в ней ХГ связывается с антисывороткой, а эритроциты не подвергаются агглютинации и оседают на дно ампулы. Если же добавляют мочу небеременной женщины, не содержащую ХГ, происходит реакция агглютинации, и эритроциты распределяются равномерно в ампуле. Для проведения диагностической реакции содержимое ампулы растворяют в 0,4 мл прилагаемого к набору фосфатного буфера и с помощью прилагаемого капилляра добавляют две капли свежей утренней профильтрованной мочи. Содержимое ампулы перемешивают и ампулу помещают при комнатной температуре. Через 2 часа учитывают реакцию: равномерное распределение эритроцитов в ампуле свидетельствует об отсутствии беременности, оседание их на дно в виде кольца или пуговицы – о наличии беременности.
