83. Определение титра вируса по инфекционным единицамлокальных повреждений.

 Из локальных повреждений, вызываемы вирусами, известныбляшки в зараженных культурах клеток (островки мертвых клеток в слое живых) и оспины — некротические узелки на ХАО куриных эмбрионов. В этих случаях говорят о бляшкообразующих единицах (БОЕ) и оспинообразующих единицах (ООЕ). Одна БОЕ равна дозе вируса, способной образовать одну бляшку, а одна ООЕ — одну оспину.

Методика определения сводится к следующему. Точными объемами исследуемого вируссодержащего материала заражают несколько культур клеток в матрасах или куриных эмбрионов в ХАО. Затем подсчитывают количество бляшек в каждом матрасе и количество оспин в каждом курином эмбрионе. Рассчитывают среднее арифметическое. Оно точно равно количеству БОЕ или ООЕ вируса. Поскольку объем заражающей дозы точно известен, нетрудно рассчитать, сколько БОЕ или ООЕ приходится на еди­ницу объема вируссодержащего материала. Это и будет титром вируса в материале.

Например, вируссодержащим материалом в разведении 10-3 заразили 5 эмбрионов и получили 10, 13, 6, 9 и 10 оспин. Сред­нее арифметическое суммы составит 9,6. Титр вируса в ООЕ оп­ределяют по формуле, где а— среднее количество подсчитанных оспин; V— объем ви­руссодержащего материала, использованного для заражения; п — степень разведения вируссодержащего материала. Следовательно, исходя из наших расчетов, в 0,2 мл вируссодержащего материала в разведении 10-3содержится 48000 ООЕ.

Этот пример титрования вирусов является упрощенным, так как он не учитывает случаев высокой концентрации вируса в ма­териале, при которой бляшки или оспины могут сливаться между собой, и их невозможно будет сосчитать. Обычно счету поддаются бляшки и оспины, количество которых не превышает 50 на матрас или ХАО. Поскольку титр вируса в исследуемом материале обычно не известен (он подлежит определению),то неизвестно, в каком разведении надо брать материал для заражения, чтобы избежать слияния бляшек или оспин.

В этом случае готовят десятикратные разведения вируссо­держащего материала (10-1, 10-2, 10-3 и т.д.) и каждым разведением заражают равные группы культур клеток или куриных эмбрионов Подсчитывают количество бляшек или оспин, рассчитывают среднее арифметическое. Титр вируса находят, по формуле.

Метод титрования вирусов в БОЕ дает наиболее достоверные данные об их концентрации, но могут возникнуть технические трудности, связанные с получением и подсчетом бляшек. Что касается оспин, то их использование для титрования ограничивается довольно немногочисленными вирусами, способными образовывать узелки на ХАО куриных эмбрионов.