Биологическая проба— метод диагностики инфекционных болезней, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом с целью обнаружения и идентификации возбудителей или их токсинов
Лабораторные животные должны отвечать определенным требованиям:
1. Быть абсолютно здоровы, т. е. свободными от инфекции и инвазии.
2. Обладать стандартной чувствительностью (восприимчивостью) к определенным вирусам; лучше использовать животных одной линии.
3. Должны быть одинакового возраста (желательно молодые) и пола, породности, упитанности и массы тела.
Лабораторных животных используют для:
1. обнаружения вируса в патматериале;
2. первичного выделения вируса из патматериала;
3. накопления вирусной массы;
4. поддержания вируса в лаборатории в активном состоянии;
5. титрования вируса;
6. получения гипериммунных сывороток;
7. в качестве тест-объекта в реакции нейтрализации.
Методы экспериментального заражения лабораторных животных.
Вируссодержащий материал может быть введен лабораторным животным различными методами. Наиболее часто используются заражения: подкожное (п/к), внутрикожное (в/к), внутримышечное (в/м), внутрибрюшинное (в/б), внутривенное (в/в), интраназальное (и/н), интраце-ребральное (и/ц). Однако в каждом конкретном случае исследователь стоит перед выбором введения материала каким-то одним способом.
Выбор метода заражения определяется тропизмом вируса. Под тропизмом вируса понимают способность его репродуцироваться в определенных типах клеток организма. Вирусы, репродуцирующиеся в нервных клетках, называются нейротропными (например, вирус бешенства), репродуцирующиеся в клетках кожи - дермотропными (например, вирус оспы), в клетках легких - пневмотропными (вирус гриппа). Вирусы, способные репродуцироваться в нескольких типах клеток, называются политропными (вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в клетках органов дыхания и размножения), а во всех типах клеток - пантропными (вирус чумы собак).
Зная тропизм вируса, материал вводят в органы, содержащие чувствительные к этому вирусу клетки. Например, вирус гриппа вводят интраназально, вирус оспы - внутрикожно, вирус бешенства - интрацеребрально. Пантропные вирусы лучше разносятся по организму при введении их внутривенно или внутрибрюшинно.
Если же исследователь не имеет данных о тропизме находящегося в материале вируса, то заражают животных нескольких групп разными методами.
Объем заражающей дозы материала значительно варьирует в зависимости от метода внесения и вида животных (0,1-5,0 мл).
Очень часто при первичном заражении не выявляется вирус, тогда через эти же биологические системы осуществляют второй и третий пассажи вирусов - «слепые пассажи». При отрицательном результате трех пассажей исследования по выделению активных форм вирусов прекращают. Под пассажем понимают заражение чувствительной живой системы с целью получения от нее новой популяции вируса.
За зараженными животными ведут наблюдения, отмечая изменения в их поведении, появление специфических симптомов болезни в соответствии с инкубационным периодом данной инфекции.
Действие вируса проявляется на лабораторных и естественно-восприимчивых животных следующим образом: 1) гибелью через определенный период времени; 2) развитием клинических признаков болезни; 3) патоморфологическими изменениями в органах и тканях павших животных.
Известно, что фильтрующиеся вирусы в отличие от микробов не развиваются на искусственных питательных средах. Поэтому для культивирования их применяют другие методы: используются лабораторные модели культуры клеток, лабораторных животных и куриные эмбрионы.
