1)Способы окрашивания микробов делятся на простые и сложные, или дифференциальные.
При простой окраске употребляется только один краситель, чаще всего - фуксин Пфейффера (экспозиция 1-2 мин), или синька Леффлера (экспозиция 3-5 мин). Их относят к группе анилиновых красителей. Сложные, или дифференциальные способы окраски бактерий основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки, и применяются для детального изучения структуры клетки, также для дифференциации данного микроба от других. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.
|
Простые |
Сложные (основные) |
||
|
Метод |
Цель |
Метод |
Цель |
|
Окраска метиленовым синим |
Изучение: · формы бактерий · их расположения в мазке |
Окраска по Граму (основной метод окраски в бактериологии) |
Определение типа строения клеточной стенки |
|
Окраска по Цилю-Нильсену |
Выявление: - кислотоустойчивых бактерий (микобактерий) - спор |
||
|
Окраска по Нейссеру |
Выявление включений волютина и идентификация по их наличию коринебактерий |
||
|
Окраска водным фуксином |
Окраска по Бурри-Гинсу |
Выявление капсул |
|
|
Окраска по Морозову |
Выявление: · жгутиков · трепонем · вирусов натуральной и ветряной оспы |
||
|
Окраска по Здрадовскому |
Выявление хламидий |
||
|
Окраска по Романовскому-Гимзе |
Выявление: · риккетсий · спирохет · простейших |
||
Окраска по Граму (механизм)
Этап |
Продолжительность |
Результат |
|
|
Грамположительные
|
Грамотрицательные |
||
|
Генциановый фиолетовый |
1 – 2 минуты |
Синие |
Синие |
|
Раствор Люголя |
1 – 2 минуты |
Синие |
Синие |
|
Этиловый спирт с последующим промыванием водой |
? минуты |
Синие |
Бесцветные |
|
Водный фуксин |
1 – 2 минуты |
Синие |
Красные |
Грамхарактеристика основных форм бактерий
n Шарообразные формы бактерий - кокки грамположительны (Гр+), за исключением гонококка, менингококка и катарального микрококка.
n Цилиндрические формы: спорообразующие палочки - бациллы и клостридии – Гр+.
n Неспорообразующие (собственно бактерии) – грамотрицательны (Гр-), за исключением актиномицетной линии бактерий. В последнюю входят: коринебактерии, в т. ч. возбудитель дифтерии; микобактерии – возбудители туберкулёза, микобактериозов и актиномикоза.
n Актиномикотическая друза окрашивается по Граму смешанно: аморфный центр - Гр+, периферия - Гр-.
n Извитые формы: вибрионы, спириллы, спирохеты – Гр-.
n Риккетсии, хламидии - Гр-.
n Микроорганизмы с дефектами или не имеющие КС–Гр-.
2)-------------
3)
|
1. Бактериологическое исследование Материал: испражнения, кровь, моча, желчь, соскоб розеол. Ранний метод (при бактериемии) – выделение возбудителя из крови (получение гемокультуры). ? Кровь ? посев в среду Раппопорт 1:10 ? висмут-сульфит агар (или любая ДДС) ? пересев подозрительной колонии на комбинированные среды ? изучение морфологических, тинкториальных, б/х свойств ? РА на стекле с диагностическими О- и Н-антисыворотками, фаготипирование, чувствительность к АБ. ? Испражнения, желчь, моча (поздние методы диагностики) ? среда обогащения любая? ДДС… 2. СЕРОДИАГНОСТИКА (с 5-7 дня болезни). В основном используется РНГА с О- и Н-эритроцитарным диагностикумом (диагностический титр 1:200 и выше). В начале ставится с комплексным эритроцитарным диагностикумом АBCDE, затем с брюшнотифозным эритроцитарным О9-диагностикумом, затем с эритроцитарным Нd-диагностикумом, а в последующем с эритроцитарным Vi-диагностикумом. В прошлом широко применялась реакция Видаля с монодиагностикумами к конкретным возбудителям. Реакция ставится с 4-мя диагностикумами: О-брюшнотифозный монодиагностикум, Н-брюшнотифозный монодиагностикум, ОН-паратифозный А диагностикум, ОН-паратифозный В диагностикум. Диагностический титр реакции равен 1:200. Помимо диагностики острого заболевания с помощью реакции Видаля можно распознать и ранее болевших брюшным тифом (ретроспективная диагностика). Также может быть + в течение некоторого времени после прививок (прививочная реакция). В процессе развития инфекции накопление агглютининов идёт своеобразным путём: в конце первой недели появляются О-агглютинины (разгар заболевания); с выздоровлением они исчезают и появляются Н-агглютинины. ?В настоящее время Реакция Видаля используется реже. В основном применяют РНГА. Выбор метода и материала зависит от этапа заболевания:
Для выявления бактерионосительства основной метод – бактериологическое исследование испражнений, мочи, желчи. Вспомогательный метод – серологический: используется РНГА с Vi-эритроцитарным диагностикумом (титр 1:40). Vi-антитела не имеют диагностического или прогностического значения, но представляют интерес у бактерионосителей. Большая резистентность бактерий, несущих Vi-Аг, к защитным силам организма обуславливает, очевидно, и более длительное носительство этих форм (V-форм) тифозных палочек, вследствие чего в крови носителей обнаруживаются Vi-антитела. 3. Экспресс-диагностика при эпидемических вспышках для выявления антигенов в крови (РИФ, ИФА).
|
||||||||||||||||||||
|
Брюшной тиф и паратифы – острые инфекционные заболевания, характеризующиеся глубокой острой интоксикацией, бактериемией, увеличением печени и селезёнки, энтеритом и специфическим поражением лимфоидного аппарата тонкого кишечника. Патогенез брюшного тифа: Рот ? проникновение в тонкую кишку - стадия инфицирования ? из просвета кишки они попадают в слизистую оболочку, накапливаются в основном в пейеровых бляшках ? далее проникают в регионарные лимфоузлы (лимфоидный аппарат тонкого кишечника), где интенсивно размножаются, что вызывает развитие воспалительного процесса и сенсибилизацию лимфоцитов (ГЗТ) - первичная регионарная реакция – это период инкубации (2-3 недели). Далее в результате нарушения гемолимфатического барьера сальмонеллы попадают в кровь - стадия бактериемии ? возможно проникновение в фагоциты и размножение в них ? после гибели фагоцитов сальмонеллы в больших количествах высвобождаются в кровь, часть бактерий под действием бактерицидных свойств крови разрушается, и эндотоксин высвобождается, вызывая интоксикацию, ? появляются первые клинические симптомы заболевания (первая неделя болезни). Клиническая картина: Температура 390-400С, общая интоксикация, в тяжёлых случаях – с поражением ЦНС (возникает status tiphosus – сильная головная боль, апатия, резкая слабость, нарушения сознания, кома), боли в животе, диарея, сыпь. Тиф - от греч. typhos - туман, спутанное сознание. 2 неделя – стадия паренхиматозной диффузии – из крови сальмонеллы поглощаются макрофагами печени, костного мозга, селезёнки, лимфатических узлов и других органов. Особенно в большом количестве возбудитель накапливается в желчных ходах печени и протоках желчного пузыря. На коже появляется розеолезная сыпь. 3 неделя – выделительно-аллергическая стадия По мере формирования иммунитета начинается процесс освобождения от возбудителя. Этот процесс осуществляют все железы, мочевыделительная система и особенно печень и желчный пузырь. Сальмонеллы с желчью вновь попадают в кишечник, лимфоидные образования которого уже сенсибилизированы антигенами сальмонелл ? вторичное внедрение в уже сенсибилизированные узлы вызывает в них гиперергическую реакцию, которая проявляется в виде некроза и образования язв. Эта стадия опасна возможностью прободения стенки кишечника (язв), внутреннего кровотечения и развития перитонита. 4 неделя – стадия реконвалесценции. |
||||||||||||||||||||
|
Брюшной тиф и паратиф А – антропонозные кишечные инфекции (резервуар – человек). Источник инфекции – больные и носители (выделение с испражнениями, мочой, слюной, потом, грудным молоком). Особенно опасны хронические носители и лица с лёгкими и атипичными формами. Возбудители паратифов В и С также выделены от некоторых животных и птиц. Механизм заражения – фекально-оральный. |
